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考馬斯亮藍染色步驟全解析

2024-12-25 17:04:32

來源/作者:普拉特澤-生物醫(yī)學整體課題外包平臺

    考馬斯亮藍染色步驟全解析來啦!這可是生物科研實驗中的“必備技能”快跟著普拉特澤生物的步伐,一起探索這個神奇的染色過程吧!

1)前期準備

?電泳結束?:首先,通過SDS-PAGE電泳將蛋白質進行分離,電泳結束后,取出凝膠。

?清洗凝膠?:將凝膠放入加有超純水的平皿中潤洗,以去除殘留的電泳液。如果凝膠較厚,可以適當增加洗滌次數和延長洗滌時間,以去除凝膠中的干擾雜質。

2)染色步驟

?Step1配制染色液:考馬斯亮藍染色液通常由亮藍G-250、甲醇、醋酸和去離子水組成。具體配方為:亮藍G-250 0.1%(w/v),甲醇50%(v/v),醋酸10%(v/v),去離子水余量。
      將亮藍G-250溶解在甲醇中,加入醋酸,再加入去離子水,調整到最終體積。

?Step2?加入染色液?:將配制好的染色液倒入裝有凝膠的容器中,確保染色液完全浸沒凝膠。

?Step3?進行染色?:將容器放在水平搖床上,室溫下震蕩染色。染色時間根據凝膠的厚度和所需染色深度進行調整,通常為30分鐘至2小時。在染色過程中,要注意觀察凝膠的變色情況,避免染色時間過長導致背景顏色過深。

3)脫色步驟

?1.配制去染液?:去染液通常由甲醇、醋酸和去離子水組成。具體配方為:甲醇40%(v/v),醋酸10%(v/v),去離子水余量。將甲醇和醋酸混合,再加入去離子水,調整到最終體積。

?2.倒出染色液?:染色結束后,倒出染色液或將其回收以備后用(通??苫厥帐褂?次左右)。

?3.加入去染液?:將配制好的去染液倒入裝有凝膠的容器中,確保去染液完全浸沒凝膠。

?4.進行脫色?:將容器放在水平搖床上,室溫下震蕩脫色。脫色時間根據實驗需求進行調整,通常為2-3小時或直至背景清晰。如果需要更低背景的凝膠,可以用純水脫色1小時以上或過夜。


4)觀察與記錄

?觀察結果?:將脫色后的凝膠放在顯微鏡下觀察,可以看到清晰的蛋白質條帶。

?記錄結果?:使用相機或掃描儀將觀察結果記錄下來,以便后續(xù)分析和比較。

在操作過程中,需要注意以下幾點:

——考馬斯亮藍染色液呈酸性,有輕微腐蝕性,操作過程中一定要佩戴手套,避免染料接觸皮膚。

——考馬斯亮藍染料有毒性,不建議加熱使用。操作后需妥善處理廢棄物。

——染色前用純水清洗能大大減少SDS等干擾雜質。

——染色后請盡快拍照,純水長時間浸泡會導致蛋白和染料的流失。

怎么樣?考馬斯亮藍染色步驟全解析就到這里啦!是不是很簡單呢?下次再做實驗的時候,不妨按照這些步驟來操作一下~如果在實驗過程中遇到技術問題
或者需要實驗外包代做,可與我們技術老師聯系18570028002(微信同號)


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