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非酒精性脂肪肝（NAFLD）診斷與研究全攻略：從臨床指標(biāo)到實驗方案

非酒精性脂肪肝（NAFLD）診斷與研究全攻略由普拉特澤生物動物檢測平臺總結(jié)分享，動物檢測平臺為廣大科研實驗人員提供非酒精性脂肪肝外包實驗服務(wù)，本篇介紹了非酒精性脂肪肝(NAFLD)動物實驗的關(guān)鍵評估指標(biāo)和標(biāo)準(zhǔn)化實驗方案，包括常用動物模型選擇、實驗設(shè)計要點、組織病理學(xué)評估方法以及分子生物學(xué)檢測技術(shù)，為NAFLD基礎(chǔ)研究提供方法學(xué)參考。
——下面將詳細介紹NAFLD動物實驗的關(guān)鍵指標(biāo)和標(biāo)準(zhǔn)化操作流程。

一、NAFLD動物模型的選擇策略

1. 常用動物模型比較

2. 模型選擇考量因素

①研究目的匹配度：基礎(chǔ)機制研究vs藥物療效評估

②實驗周期要求：短期篩選vs長期慢性研究

③病理特征相關(guān)性：單純脂肪變vs NASH伴纖維化

④代謝異常類型：肥胖相關(guān)vs糖尿病相關(guān)

二、實驗設(shè)計與關(guān)鍵操作流程

1. 標(biāo)準(zhǔn)化實驗方案

基礎(chǔ)實驗設(shè)計框架：

動物分組(對照組+模型組+干預(yù)組)

↓

適應(yīng)性喂養(yǎng)(1周)

↓

模型建立(4-24周)

↓

代謝指標(biāo)監(jiān)測(每周體重、每2周空腹血糖)

↓

終末實驗(口服糖耐量/胰島素耐量試驗)

↓

樣本采集(血清+肝臟組織)

↓

指標(biāo)檢測(生化+組織學(xué)+分子生物學(xué))

2. 關(guān)鍵操作要點

飲食配制：HFD建議60%脂肪供能比，MCD飲食需嚴格質(zhì)量控制
環(huán)境控制：恒溫(22±2℃)、恒濕(50±10%)、12h/12h光暗周期
樣本采集：禁食4-6h后取材，肝臟分葉取樣避免區(qū)域差異

三、核心評估指標(biāo)體系

1. 代謝表型指標(biāo)

基礎(chǔ)代謝參數(shù)：

體重增長曲線
空腹血糖(FBG)
胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)
口服糖耐量(OGTT)曲線下面積

血清生化指標(biāo)：

肝功能：ALT、AST、ALP
脂代謝：TG、TC、HDL-C、LDL-C
炎癥因子：TNF-α、IL-6、IL-1β

2. 肝臟病理學(xué)評估

組織學(xué)評分系統(tǒng)：

脂肪變分級：

0級：<5%
1級：5-33%
2級：34-66%
3級：>66%

NAS評分系統(tǒng)：

脂肪變(0-3分)
小葉炎癥(0-3分)
肝細胞氣球樣變(0-2分)
≥5分診斷NASH

特殊染色技術(shù)：

油紅O染色(冷凍切片)：脂滴定量分析
Sirius Red染色：膠原纖維沉積評估
免疫組化：α-SMA(星狀細胞活化標(biāo)志)

3. 分子機制研究指標(biāo)

脂代謝通路：SREBP-1c、PPARγ、ACC等蛋白表達
炎癥信號：NF-κB、TLR4通路激活狀態(tài)
纖維化標(biāo)志：α-SMA、Collagen I、TGF-β mRNA水平
氧化應(yīng)激：MDA含量、SOD/GSH-Px活性

四、實驗質(zhì)量控制要點

模型驗證標(biāo)準(zhǔn)：

HFD模型：肝指數(shù)(肝重/體重)增加>50%
MCD模型：NAS評分≥5分
ob/ob小鼠：體重較野生型增加100%

常見問題解決方案：

模型成功率低：嚴格飲食質(zhì)量控制，避免交叉污染
個體差異大：增加樣本量(每組n≥8)，隨機分組
病理評分不一致：采用雙盲法閱片，Kappa檢驗一致性

數(shù)據(jù)報告規(guī)范：

詳細記錄飲食配方、動物周齡、飼養(yǎng)條件
提供代表性病理圖片(200×、400×)
標(biāo)注染色方法和抗體信息

五、前沿技術(shù)與研究展望

1.新型模型系統(tǒng)：

人源化肝臟小鼠模型
類器官共培養(yǎng)系統(tǒng)
微生物組移植模型
2.多組學(xué)整合分析：

肝臟轉(zhuǎn)錄組與代謝組關(guān)聯(lián)分析
單細胞測序解析NAFLD異質(zhì)性
空間轉(zhuǎn)錄組定位病理區(qū)域
3.無創(chuàng)監(jiān)測技術(shù)：

小動物超聲彈性成像
顯微CT肝臟脂肪定量
代謝籠長期監(jiān)測系統(tǒng)

結(jié)論與建議

建立標(biāo)準(zhǔn)化的NAFLD動物實驗方案需要綜合考慮：

研究目標(biāo)與模型病理特征的匹配度
多維度評估體系的系統(tǒng)應(yīng)用
實驗過程的質(zhì)量控制措施

最佳實踐建議：

機制研究首選HFD或基因修飾模型
藥物評價推薦MCD或復(fù)合模型
結(jié)合影像學(xué)和病理學(xué)驗證結(jié)果
遵循ARRIVE指南報告實驗設(shè)計

好，今天關(guān)于非酒精性脂肪肝（NAFLD）

診斷與研究全攻略

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