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   ELISA酶聯(lián)免疫吸附實驗實驗操作的常見問題答疑由普拉特澤生物旗下生物科研培訓(xùn)品牌《春風(fēng)學(xué)院》對數(shù)千例ELISA實驗分析后總結(jié)分享，文章末更有ELISA實驗理論+實操視頻課程參考學(xué)習(xí)，快來學(xué)習(xí)吧。

   Qustion1：顯色極淺或不顯色

   （1）漏加底物成分、底物失效、底物配制濃度計算錯誤；

   （2）整個ELISA過程中存在抗原或抗體不匹配；

   （3）整個ELISA過程中樣品稀釋過度；

   （4）稀釋體系錯誤，如使用含蛋白質(zhì)成分的試劑進(jìn)行包被。

   Qustion2：全板陽性

   （1）酶標(biāo)抗原或抗體濃度過高，嘗試降低濃度；

   （2）使用的封閉試劑不正確，或者未封閉；

   （3）酶標(biāo)抗原或抗體與體系中其他試劑有結(jié)合；

   （4）底物被酶標(biāo)抗原或抗體污染。

   Qustion3：不均勻顯色

   （1）酶標(biāo)板質(zhì)量問題，重新檢測酶標(biāo)板均一性；

   （2）包被或加樣過程中有部分孔漏加、少加等情況，可能是操作者不細(xì)心，也可能是移液器漏氣；

   （3）加樣時移液器打入太多氣泡；

   （4）選購的酶標(biāo)板不正確，可能誤選其他用途的板子；

   （5）溫育過程中板子疊放過厚；

   （6）加樣或稀釋過程中試劑沒有充分混勻，或稀釋梯度計算錯誤；

   （7）洗板失誤，部分孔未加洗滌液或洗滌液加入去垢劑后未充分混勻，或洗滌過程中帶入氣泡。

   Qustion4：顯色過快

   （1）酶標(biāo)抗原或抗體濃度過高；

   （2）某一試劑濃度過高。

   Qustion5：顯色過慢

   （1）酶標(biāo)抗原或抗體濃度過底，或者標(biāo)記效率低，或者標(biāo)記后免疫活性受影響；

   （2）試劑被污染，如HRP酶標(biāo)記的抗原或抗體被疊氮鈉污染；

   （3）反應(yīng)溫度過低；

   （4）底物緩沖液pH不正確。

   Qustion6：背景深

   （1）酶標(biāo)抗原或抗體濃度過高；

   （2）抗體的非特異性結(jié)合；

   （3）抗原或抗體不純；

   （4）二抗的種屬交叉識別。
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