腦缺血模型造模步驟—上【腦缺血模型外包】
2022-10-26 16:38:42
來源/作者：普拉特澤-生物醫(yī)學整體課題外包平臺
腦缺血模型/缺血再灌注模型實驗步驟由普拉特澤生物為大家總結分享，歡迎留言指正。目前，腦缺血模型普遍采用國際上廣泛認可的大腦中動脈栓塞模型（MCAO），其發(fā)病機理與人類缺血性腦卒中表現(xiàn)相似，對于制作模擬人腦缺血模型對腦缺血發(fā)病機制及藥物篩選有重要意義。普拉特澤生物動物實驗平臺專業(yè)為科研人員提供腦缺血動物模型外包與代做服務，希望能為廣大科研人員提供科研道路上的一點幫助。
本文就來跟大家分享，大腦中動脈栓塞模型（MCAO）的詳細造模介紹與步驟：
一般采用雄性SD大鼠即可，手術成功率也比較高，小鼠也是可行的，但是栓線的型號和進入的深度不同）?？紤]大鼠雌激素水平對腦缺血損傷可能的神經保護機制及激素水平的生理性波動對大鼠情緒的影響，采用血管解剖結構更為清晰的雄性SD大鼠作為MCAO的動物模型。大鼠大腦中動脈的長度和粗細與其體重形成正比，目前多主張大鼠體重控制在250-300g。
一、實驗準備
1、樣本準備：6-8周雄性SD大鼠12只
2、實驗分組：Sham組3只；再灌注6H組3只；再灌注24H組3只；再灌注48H組3只
3、實驗器材準備：手術剪、手術鑷、線栓、縫合針、縫合線、棉線
二、腦缺血造模實驗操作步驟
1、術前12小時大鼠禁食，自由進水。
2、3 %戊巴比妥鈉按60 mg/kg劑量由腹腔注射進行麻醉。
3、待大鼠麻醉后采取仰臥位固定于操作臺。
4、于頸正中作一縱向切口，仔細分離肌肉，暴露出右側頸總動脈、頸外動脈和頸內動脈。
5、小心分離血管周圍的神經組織，用棉線在頸外動脈的遠心端做永久結扎，在頸總動脈近心端和頸內動脈做臨時結扎。
6、自頸外動脈遠心端剪開一個小口，將線栓從頸外動脈經過頸總動脈送入頸內動脈，當線栓上的黑色標志剛過頸總動脈的分叉口顯示在頸內動脈處時，停止下送線栓。
7、將線栓連同頸外動脈一起臨時結扎，缺血2 H后將線栓拔出頸內動脈（不要完全拔出），松開頸總動脈的臨時結扎恢復供血。
8、再灌注6/24/48 H后處死大鼠，將腦組織取出后分成6份，1份凍存?zhèn)溆茫溆?/span>5份進行TTC染色。
9、Sham組大鼠進行頸部皮膚切開與血管分離后不做下線栓處理，直接縫合。
三、腦缺血造模實驗注意事項
1、栓線的直徑和線頭是否光滑？
因為它直接關系到進線的難度和手術時間。栓線直徑必須要考慮到動物的體重，不同體重的動物進線深度不同。所以保證動物體重基本一致，提前做預實驗確定進線深度是非常有必要的。
2、栓線不可過硬。
過硬線栓容易找手感，但是容易出現(xiàn)刺破蛛網(wǎng)膜下腔血管，導致顱內出血。同時過硬線栓還會改變血管自然形態(tài)，當線栓插入血管以后，因為線栓過硬，血管肌張力無法使得線栓改變形態(tài)，只能被線栓改變形態(tài)，導致血管處于緊繃狀態(tài)，對于再灌注操作不利。
3、栓線插入深度？
許多文獻報道插入深度為18.5±0.5mm（270g左右大鼠），具體的長度需根據(jù)實驗的實際操作進行調整，18.5mm并不是標準?？傊?，以遇到輕微的阻力為準，此時栓線正好進入顱內的大腦前動脈，阻塞大腦中動脈的開口。建議當插線近18mm（做上標記）時，注意手的感覺，輕緩推進，直至感覺到阻力為止（當遇到阻力后，再插線會見到線彎曲）
4、不同亞型鼠，如Wistar大鼠、F344大鼠或SD大鼠，它們的腦血管解剖和缺血敏感性不同。同樣的操作，Wistar大鼠腦梗死面積較小，F344大鼠腦梗死面積最大，SD大鼠居中。因此，正式試驗前確定好大鼠種類也是比較重要的。
5、血糖濃度高或低均可加重腦損傷，增加梗死面積，加重腦水腫，增大梗死后出血率。因此有必要監(jiān)測和報告血糖指標。實驗前12h～24h動物禁食是防止血糖升高的有效手段。
6、最好能夠實時觀測顱腦血流情況。這樣可以準確判斷線栓是否阻塞 MCA，一旦血流灌注量下降超過70%，即代表線栓阻塞MCA。
那最常用的MCAO模型我們就講完啦，和你的操作步驟有沒有什么不同的呢？有任何不懂的問題歡迎隨時留言給技術為您答疑解惑。如果您有腦缺血模型外包代做的需求歡迎選擇普拉特澤生物~
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