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活性氧檢測化學(xué)發(fā)光法實驗步驟【活性氧檢測外包】

大家好，今天普拉特澤生物跟大家一起學(xué)習(xí)的是活性氧檢測方法中最常用的方法之一：化學(xué)發(fā)光法?；瘜W(xué)發(fā)光測定法是儀器分析中靈敏度最高的方法之一，特點是化學(xué)反應(yīng)與發(fā)光現(xiàn)象同時發(fā)生，從而有望成為不穩(wěn)定化合物的在線、原位分析的有效手段。上期普拉特澤生物給大家介紹了介紹了熒光法檢測細胞活性氧的實驗方法，可以回去復(fù)習(xí)兩種方法比較學(xué)習(xí)，現(xiàn)在我們就來看看如何化學(xué)方法來檢測細胞的活性氧吧~

近年來，隨著光電檢測技術(shù)的不斷進步,化學(xué)發(fā)光分析法已在醫(yī)學(xué)、環(huán)境以及工業(yè)分析等許多領(lǐng)域里得到廣泛的應(yīng)用。而活性氧也在人體內(nèi)的作用受到人們極大的關(guān)注,報道了大量有關(guān)活性氧，特別是超氧自由基和羥自由基與機體細胞的許多功能活動以及各種疾病，如癌、動脈硬化、糖尿病、心腦血栓、缺氧再灌注綜合癥、感染、以及衰老效應(yīng)等，激發(fā)了人們?nèi)ヌ剿鳌⑸钊氲匮芯炕钚匝醯母鞣N特特性。

活性氧的化學(xué)發(fā)光研究也是活性氧測定法研究領(lǐng)域中比較活躍的分支之一，目前比較成功的活性氧化學(xué)發(fā)光測定法主要有魯米諾法、光澤精法和甲殼動物熒光素法。本文就給大家簡單盤一盤這幾種方法的研究與應(yīng)用情況。

1、魯米諾法

魯米諾是化學(xué)發(fā)光研究最常用的試劑之一，從某種意義來說，沒有這一試劑的出現(xiàn)，化學(xué)發(fā)光研究很難有現(xiàn)在的水平,所以,對于魯米諾的研究與應(yīng)用一直都非常活躍。

魯米諾在堿性介質(zhì)既可以與OH自由基反應(yīng)引起發(fā)光，也可以與O₂^-自由基或者單線態(tài)氧10₂以及H₂O₂發(fā)生化學(xué)反應(yīng)的事實基本上得到公認。魯米諾發(fā)光與否取決于活性氧的生成條件，而與魯米諾溶液的酸堿度似乎沒有直接的關(guān)系,介質(zhì)的酸堿度影響了激發(fā)態(tài)APD的發(fā)光強度和發(fā)光波長，所以，從理論上來說，魯米諾化學(xué)發(fā)光法可以應(yīng)用于各種不同介質(zhì)中的HOO、OH O測定，這就導(dǎo)致了測定選擇性差的問題。因此,在許多情況下,活性氧的魯米諾化學(xué)發(fā)光法只能作為定量或者定性分析的輔助手段。

2、光澤精法

與魯米諾一樣，光澤精(Lucigenin，N，N’dimethyl-99’-diacridinum)也是廣泛獲得使用的化學(xué)發(fā)光試劑之一，在發(fā)現(xiàn)魯米諾化學(xué)發(fā)光后，Gleu和Petsch兩人]于1935年報道了第一篇光澤精化學(xué)發(fā)光的論文,在堿性條件下，光澤精與H₂O₂_、O_2-等過氧化物作用形成激發(fā)態(tài)N甲基吖啶(N methylacridan)并發(fā)出波長523nm的微弱光.相比之下，光澤精對于活性氧測定的選擇性則相對比較高，有許多報道光澤精只有在超氧活性自由基存在下發(fā)生發(fā)光現(xiàn)象,但是,在實際應(yīng)用中,過氧化氫的分解過程同樣產(chǎn)生O_2-自由基，難以定性地判斷分析結(jié)果，在光澤精對超氧自由基和羥自由基我們的研究結(jié)果也表明,在超氧自由基存在下,光澤精可以發(fā)出強烈的光,而羥自由基的存在并沒有使得我們的儀器觀測到任何的發(fā)光現(xiàn)象。

3、甲殼動物熒光素法

甲殼動物熒光素中最典型的一類試劑英文名稱為Cypridina的熒光素,來自于日本海和加勒比淺海中的一種小甲殼動物，已經(jīng)被應(yīng)用于化學(xué)發(fā)光研究的有化學(xué)名稱為2-methyl-6-phenyl-3，7-dihydroimi- dazo-[1，2-a]pyrazin-3-one的試劑，簡稱CLA.1。

CLA的特點是不與生物機體內(nèi)的H₂O₂或者OH發(fā)生反應(yīng)，只與O_2--或者1O₂發(fā)生特異性的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，這一現(xiàn)象已被應(yīng)用于白血球的功能性檢查方面的研究。Suzuki等人還開發(fā)了CLA的衍生物， MCLA和FCLA。FCLA是目前化學(xué)發(fā)光試劑中發(fā)光波長(532nm)最長的試劑，發(fā)光效率比CLA高出近10倍，由于這一特點,在進行生物樣品中·O-或者10測定時，能夠有效地降低酶、OH等干擾物質(zhì)的影響。

好啦，化學(xué)發(fā)光法檢測活性氧的魯米諾、光澤精、甲殼動物熒光三種方法就給大家簡單介紹完啦，希望能幫到正在準備做活性氧檢測的實驗員們。如果您覺得有實驗相關(guān)的問題需要咨詢或有細胞活性氧檢測外包的需求，歡迎選擇普拉特澤生物！

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