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有一個(gè)朋友來(lái)找我咨詢(xún)用流式檢測(cè)細(xì)胞因子的問(wèn)題，他之前用ELISA 檢測(cè)細(xì)胞因子的話，發(fā)現(xiàn)樣本量需求很多，然而有些樣本量又比較少怎么辦呢，那么接下來(lái)我來(lái)對(duì)比幾種檢測(cè)細(xì)胞因子的優(yōu)缺點(diǎn)，供各位大大們閱讀參考啦~

細(xì)胞因子（cytokine，CK）：是由免疫細(xì)胞（如單核、巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞等）和某些非免疫細(xì)胞（內(nèi)皮細(xì)胞、表皮細(xì)胞、纖維母細(xì)胞等）經(jīng)刺激而合成（一般是免疫細(xì)胞）、分泌的一類(lèi)生物活性物質(zhì)分泌的蛋白質(zhì)，在體內(nèi)廣泛參與免疫調(diào)節(jié)及炎癥反應(yīng)、組織修復(fù)、刺激造血系統(tǒng)、刺激細(xì)胞的增殖與凋亡等重要生理活動(dòng)，在抵抗外來(lái)病原及維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境平衡中均起重要作用。

細(xì)胞因子的作用方式：自分泌作用、旁分泌作用、內(nèi)分泌作用。

細(xì)胞因子的作用特點(diǎn)：多效性、重疊性、協(xié)同性、拮抗性和雙重性。

根據(jù)產(chǎn)生細(xì)胞因子的細(xì)胞種類(lèi)不同分類(lèi)：白細(xì)胞介素（interleukin, IL)、干擾素（interferon, IFN)、腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor, TNF)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β家族（transforming growth factor-β family, TGF-β family)、集落刺激因子（colony stimulating factor, CSF)、趨化因子（chemokinefamily)、生長(zhǎng)因子（growth factor,GF）等。

細(xì)胞因子的檢測(cè)方法一般分為生物學(xué)、分子生物學(xué)測(cè)定法及免疫學(xué)（重點(diǎn)介紹）

1、生物學(xué)測(cè)定法 其原理是根據(jù)細(xì)胞因子對(duì)特定的依賴(lài)性細(xì)胞株(即靶細(xì)胞)的促增殖作用,以增殖細(xì)胞中的DNA的合成或酶活性為指標(biāo),間接推算出細(xì)胞因子的活性單位,如對(duì)IL-1、IL-2等細(xì)胞因子活性的檢測(cè)。亦可根據(jù)某些細(xì)胞因子對(duì)特定靶細(xì)胞的殺傷效應(yīng)或?qū)Σ《镜囊种谱饔眠M(jìn)行測(cè)定,如對(duì)腫瘤壞死因子及干擾素的生物活性測(cè)定。

2、分子生物學(xué)測(cè)定法 目前采用的技術(shù)有各種印跡法、斑點(diǎn)雜交、原位雜交和PCR等。通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子的基因組成或mRNA量,推算出細(xì)胞因子的合成量。

3、免疫學(xué)檢測(cè)法 其基本原理是將細(xì)胞因子作為抗原進(jìn)行定量檢測(cè)。如免疫斑點(diǎn)法、ELISA法、免疫印跡法和流式細(xì)胞儀等均已用于細(xì)胞因子的檢測(cè)。

細(xì)胞因子的檢測(cè)方法對(duì)比

1、酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）

原理：使抗原或抗體與某種酶連接成酶標(biāo)抗原或抗體，這種酶標(biāo)抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。由于酶的催化頻率很高，故可放大反應(yīng)效果，從而使測(cè)定方法達(dá)到很高的敏感度。

優(yōu)點(diǎn)：避免特異性抗體直接標(biāo)記，便宜。

缺點(diǎn)：所需樣本量多、每次僅能測(cè)定一項(xiàng)細(xì)胞因子、操作步驟和測(cè)定時(shí)間過(guò)長(zhǎng)、酶聯(lián)反應(yīng)所致的人工假象

2、流式細(xì)胞儀（CBA）

原理：利用微小、分散的顆粒捕獲液體待測(cè)物，并利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)類(lèi)似“三明治”的顆?！郎y(cè)物復(fù)合體所散發(fā)的熒光，從而測(cè)定待測(cè)物的數(shù)量。

優(yōu)點(diǎn)：所需樣本量少、快速（實(shí)驗(yàn)6-8h可以完成）操作簡(jiǎn)便、靈敏度高、重復(fù)性好、高效（同一個(gè)樣品可以同時(shí)檢測(cè)多個(gè)因子）、安全、接近生物體的分析條件（全血檢測(cè)保留細(xì)胞及生化微環(huán)境更準(zhǔn)確反應(yīng)了體內(nèi)狀況）。

缺點(diǎn)：價(jià)格略貴

3、免疫印跡法（WB）

原理：是通過(guò)聚丙烯酰胺凝膠電泳分離細(xì)胞或者組織樣本中的蛋白，經(jīng)轉(zhuǎn)膜、封閉后目標(biāo)蛋白與特有性一抗結(jié)合，再與辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過(guò)底物顯色，分析曝光條帶的位置和灰度分析獲知目標(biāo)蛋白在樣本中的表達(dá)情況

優(yōu)點(diǎn)：高特異性、高敏感性

缺點(diǎn)：細(xì)胞因子分析量較小，用WB進(jìn)行檢測(cè)有些不合適

附兩張流式檢測(cè)的圖：