流式檢測實驗報告——細胞周期檢測
2024-01-17 17:26:59
來源/作者：普拉特澤-生物醫(yī)學整體課題外包平臺
最近有做流式的朋友來找我們咨詢：
“流式檢測實驗操作是怎么樣的呢？”
我們經過不斷的嘗試，總結了一些小小經驗，分享給大家，希望能對各位做流式的朋友們有所幫助。
下面我們一起看看流式檢測實驗報告——細胞周期檢測
流式細胞術檢測THP-1-oe-NC、THP-1-oe-SLC25A37的周期情況變化。
二、實驗樣品
1.實驗樣本
2.實驗參數(shù)
三、實驗結果
1、流式檢測細胞周期
四、實驗結論
根據周期檢測結果可知，2組細胞組間無明顯差異。
五、實驗原理
細胞周期是指細胞從一次分裂完成開始到下一次分裂結束所經歷的全過程，細胞的遺傳物質復制并均等地分配給兩個子細胞。細胞周期分為間期與分裂期兩個階段。間期又分為三期：即DNA合成前期（G1期）、DNA合成期（S期）與DNA合成后期（G2期）。某些細胞在分裂結束后暫時離開細胞周期，停止細胞分裂，執(zhí)行一定生物學功能（G0期）。
由于細胞周期各時相的DNA含量不同，通常正常細胞的G1/ G0 期具有二倍體細胞的DNA含量（2N），而 G2/ M 期具有四倍體細胞的DNA含量（4N） ,而S期的DNA 含量介于二倍體和四倍體之間。PI可以與DNA結合，其熒光強度直接反映了細胞內DNA含量。因此，通過流式細胞儀PI染色法對細胞內DNA含量進行檢測時，可以將細胞周期各時相區(qū)分為G1/G0 期，S期和G2/M 期,獲得的流式直方圖對應的各細胞周期可通過特殊軟件計算各時相的細胞百分率。
六、實驗通用儀器及試劑
1. 主要儀器
2.主要試劑
一、實驗步驟
1.細胞復蘇
(1) 將ddH2O預溫至37℃。
(2) 戴上手套和口罩帽子，從液氮罐中取出裝有目的細胞的凍存管（內有1 mL細胞混合液），立即投入37℃ ddH2O中，輕搖凍存管使之在1分鐘內快速溶解。
(3) 完全溶解后，75%酒精擦拭凍存管外壁消毒后帶進超凈臺。
(4) 在超凈臺中，在15 mL滅菌離心管中預先加入10 mL新鮮配制的培養(yǎng)基，打開凍存管，將所有凍融的細胞懸液加入該離心管中，常溫1000 rpm離心3分鐘，吸除上層的培養(yǎng)液。
(5) mL培養(yǎng)基重懸細胞沉淀，輕輕吹打混勻后加入T25細胞培養(yǎng)瓶中，補足培養(yǎng)基至5 mL，置于37℃、5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
(6) 48小時后換液，細胞融合接近80%時即可傳代。
2. 細胞預處理
THP-1-oe-NC、THP-1-oe-SLC25A37細胞用含10%胎牛血清、1%雙抗的1640培養(yǎng)基，在37 ℃飽和濕度、含5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
3. 細胞處理
(1) 鋪板：處于對數(shù)生長期的細胞，胰蛋白酶消化成單細胞懸液（懸浮細胞直接收集離心），按實驗需要接種于6cm皿中，根據細胞大小和形狀調整接板細胞量。
(2) 培養(yǎng)：37℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜，待細胞長至50%~60%匯合度進行處理。
4.細胞收集及流式細胞周期檢測
（1）懸浮細胞直接離心收集；貼壁細胞用胰酶消化收集，并用含有10%FBS的培養(yǎng)基中和，收集1~5×106個細胞
（2）1500 rpm離心5 min，除去上清，PBS洗滌細胞2次
（3）去除上清，加入200 μl細胞周期快速檢測試劑輕柔混勻，制成單細胞懸液
（4）在1 h內，進行流式細胞儀檢測
（5）打開電腦和流式儀器及配套軟件，記錄開機時間
（6）點開機器“開機流程”，按提示放入ddH2O流式管（體積至少2 mL）
（7）點擊“質控/標準化”進行質控流程
（8）點擊新建實驗并命名
（9）新建兩個散點圖及一個直方圖，圖一橫縱坐標為“FSC”“SSC”，圖二橫縱坐標為“PE-A”“PE-H”，圖三橫坐標為“PE-A”
（10）上樣對照組，點擊運行，調整電壓參數(shù)，大約55左右，設置坐標軸（橫坐標最大值=縱坐標最大值）、第一門及第二門
（11）點擊記錄，最后一門收樣1×104個細胞以上
（12）保存實驗數(shù)據，可用配套的流式軟件直接分析或者導出FCS文件在modfit中分析
（13）點擊“流式儀”中“關機流程”，關閉機器，清理廢液
今天關于流式檢測實驗就分享到這兒啦~如果您在實驗過程中遇到技術問題，或者需要實驗外包和代做，可與我們技術老師聯(lián)系18570028002（微信同號）
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