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?DNA甲基化實驗介紹【科研小白】

2022-05-13 10:27:04

來源/作者:普拉特澤-生物醫(yī)學整體課題外包平臺

        DNA甲基化實驗介紹由普拉特澤生物總結(jié)分享。DNA甲基化為DNA化學修飾的一種形式,能夠在不改變DNA序列的前提下,改變遺傳表現(xiàn)。普拉特澤生物表達檢測平臺為廣大科研人員提供DNA甲基化檢測實驗,用豐富的實戰(zhàn)操作經(jīng)驗給出高質(zhì)的結(jié)果。


         那么現(xiàn)在我們來看看,什么是DNA甲基化呢?

          DNA甲基化(DNA methylation)為DNA化學修飾的一種形式,能夠在不改變DNA序列的前提下,改變遺傳表現(xiàn)。所謂DNA甲基化是指在DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶的作用下,在基因組CpG二核苷酸的胞嘧啶5號碳位共價鍵結(jié)合一個甲基基團。大量研究表明,DNA甲基化能引起染色質(zhì)結(jié)構(gòu)、DNA構(gòu)象、DNA穩(wěn)定性及DNA與蛋白質(zhì)相互作用方式的改變,從而控制基因表達。

          DNA甲基化的實驗原理是:基因組中DNA的甲基化模式是通過DNA甲基轉(zhuǎn)移酶實現(xiàn)的。DNA甲基化酶分為2類,即維持DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶(Dnmtl或維持甲基化酶)和從頭甲基化酶。根據(jù)序列的同源性和功能,真核生物DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶又分為4類:Dnmtl/METl、Dnmt2、CMTsDn-mt3Dnmtl/MET類酶參與CG序列甲基化的維持。CMTs類酶僅發(fā)現(xiàn)在植物中,主要特征是它的催化區(qū)T包埋染色體的主區(qū),并且特異性地維持CG序列的甲基化。Dnmt3類酶在小鼠、人類和斑馬魚中得到鑒定.Dnmt3aDnmt3b在未分化的胚胎干細胞中高度表達,但在體細胞中表達水平很低。它們的主要作用是從頭甲基化,但對維持甲基化也起到一定的作用,并且負責重復序列的甲基化。

            DNA甲基化類型:DNA甲基化反應分為2種類型。一種是2條鏈均未甲基化的DNA被甲基化,稱為從頭甲基化(denovo methylation);另一種是雙鏈DNA的其中一條鏈已存在甲基化,另一條未甲基化的鏈被甲基化,這種類型稱為保留甲基化(maintenance methylation)。

            DNA甲基化(methylation)是真核細胞正常而普遍的修飾方式,也是哺乳動物基因表達調(diào)控的主要表觀遺傳學形式。DNA甲基化后核苷酸順序及其組成雖未發(fā)生改變,但基因表達受影響。盡管甲基化修飾有多種方式,被修飾位點的堿基可以是腺嘌呤的N-6位、胞嘧啶的N-4位、鳥嘌呤的N-7位和胞嘧啶的C-5位,它們分別由不同的DNA甲基化酶催化,但大多發(fā)生在基因啟動子區(qū)CpG島上。DNA甲基化時,胞嘧啶從DNA雙螺旋上突出,進入能與酶結(jié)合的裂隙中,在胞嘧啶甲基轉(zhuǎn)移酶催化下,把活性的甲基從S一腺苷甲硫氨酸轉(zhuǎn)移至胞嘧啶5位上,形成5一甲基胞嘧啶(5MC)?;騿幼訁^(qū)的甲基化可導致轉(zhuǎn)錄沉寂。

             細胞發(fā)育過程中,各種表觀遺傳學現(xiàn)象之間不是孤立存在而是密切聯(lián)系的。DNA甲基化同組蛋白甲基化共同調(diào)控基因表達的現(xiàn)象最早在鏈孢霉(Neurospora crassa)中得到證實,進一步的生化研究結(jié)果表明,DNA甲基化是受組蛋白甲基化調(diào)節(jié)的。對哺乳動物的研究發(fā)現(xiàn),DNA甲基化是建立和維持其他表觀遺傳學現(xiàn)象的基礎,比如DNA甲基化位點可以募集諸如組蛋白去乙?;傅染哂幸种乒δ艿膹秃衔铮瑫r除掉該位點附近的組蛋白乙?;瘶擞?。也有研究認為,DNA甲基化是受組蛋白修飾調(diào)控的,有報道稱組蛋白修飾H3K9me能夠促進DNA甲基化的進程。

              那么關于甲基化的簡單介紹,我們就說到這里啦,更多關于DNA甲基化的問題歡迎隨時留言哦。

        

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