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動物細(xì)胞傳代培養(yǎng)詳細(xì)步驟【細(xì)胞實(shí)驗(yàn)外包】

動物細(xì)胞傳代培養(yǎng)詳細(xì)操作步驟由普拉特澤生物總結(jié)平臺分享。普拉特澤細(xì)胞實(shí)驗(yàn)平臺專業(yè)提供各類細(xì)胞實(shí)驗(yàn)外包服務(wù)，細(xì)胞的分離培養(yǎng)傳代作為所有細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)讓然是不在話下，傳代培養(yǎng)是細(xì)胞培養(yǎng)常規(guī)保種方法之一，也是所有細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)，上期我們以小鼠為例介紹了原代細(xì)胞取材培養(yǎng)的操作步驟，今天咱們就來看看和傳代細(xì)胞的培養(yǎng)是哪些步驟跟注意事項(xiàng)吧！

細(xì)胞傳代培養(yǎng)

動物細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

1、觀察培養(yǎng)基是否正常，細(xì)胞狀態(tài)如何，細(xì)胞密度如何，決定是否傳代。觀察時擰緊蓋子。

2、加熱PBS、versene、培養(yǎng)基，(提前做好) 瓶子不要倒著放，不要讓液體接觸到瓶塞。

3、打開超凈臺(先開風(fēng)機(jī)，后開照明)，用75%乙醇清潔臺面，點(diǎn)燃酒精燈。不要把廢液缸拿出去倒，如果廢液太多，可以用其他容器先裝廢液。取小離心管一個，置于架子上。

4、取尖吸管、吸量管各一支，放置在專用的架上。放置的方式，注意吸管、吸量管前端都不要與架子接觸。

5、取待傳代的細(xì)胞。打開versene，用酒精燈外焰燒。燒吸管時距離酒精燈心遠(yuǎn)些，不要把渣滓?guī)нM(jìn)去。把試劑拿入臺子的時候，盡量平穩(wěn)，不要讓試劑碰到瓶口。

6、用吸量管吸取舊的培養(yǎng)基，置離心管中，吸量管加入versene，然后將versene瓶收起來。(加versene主要是為了將舊培養(yǎng)基洗去)。在離心管中間部分將液體加入。吸液體和加液體時都不要對著細(xì)胞。

7、打開胰酶，然后將versene棄掉。換新管，用尖吸管吸取適量胰酶加入。加胰酶后，盡快放平，使細(xì)胞消化時間一致。

8、將細(xì)胞放入37度孵箱。放孵箱2min, 收胰酶，打開PBS. 之后拿出來鏡下隨時觀察。使用二次消化法，去除容器中殘余的細(xì)胞，別忘了用舊培養(yǎng)基中和。

9、取細(xì)胞，鏡下觀察消化情況。消化程度合適之后(細(xì)胞變圓，但不漂起)，用尖吸管棄去胰酶，取離心管中的培養(yǎng)基加入細(xì)胞，吹打，至所有細(xì)胞從培養(yǎng)皿底部脫落下來。用PBS洗細(xì)胞，versene對細(xì)胞有毒性，且不能被血清中和。然后吸取至離心管中，800 rpm離心5分鐘。

10、吸量管吸取適量培養(yǎng)基加入新的培養(yǎng)皿中。

11、細(xì)胞離心畢，用吸新培養(yǎng)基的管棄去上清，先把泡沫吸走。換吸量管吸取培養(yǎng)皿中培養(yǎng)基適量，加入離心管，小體積混勻，將細(xì)胞重懸，尖吸管吹勻。

12、擦計數(shù)板，用槍吸10ul的液體，計數(shù)。不要把槍伸到離心管內(nèi)。

13、吸量管吸取細(xì)胞懸液，加入新的培養(yǎng)皿中。鏡下觀察，搖勻，放入37度孵育。收超凈臺。

那動物細(xì)胞傳代培養(yǎng)時需要注意哪些注意事項(xiàng)呢？

1、嚴(yán)格保證無菌操作：細(xì)胞離體后非常脆弱，容易被細(xì)菌、真菌、支原體等感染，且細(xì)菌生存能力強(qiáng)，一般的細(xì)菌傳一代只有十幾分鐘而細(xì)胞卻需要好幾天，培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質(zhì)會被細(xì)菌消耗殆盡，而且細(xì)菌等在生長過程中分泌的毒性也會造成細(xì)胞的死亡，使傳代失敗。

2、控制消化時間：細(xì)胞消化過度會導(dǎo)致相當(dāng)一部分細(xì)胞損傷和死亡，如果細(xì)胞團(tuán)中都是死細(xì)胞，則不會貼壁；如果細(xì)胞團(tuán)中仍存在有活力的細(xì)胞，就會貼壁造成局部細(xì)胞密度不均勻，該局部較快形成中央壞死細(xì)胞區(qū)，難以培養(yǎng)傳代失敗。

3、及時關(guān)注細(xì)胞生長狀態(tài)：日常觀察培養(yǎng)液的顏色與透明度、細(xì)胞形態(tài)變化、細(xì)胞污染的觀察及防治、細(xì)胞生長狀況。

好啦，動物細(xì)胞的傳代細(xì)胞培養(yǎng)詳細(xì)的操作步驟咱們就全部講完了，如果您有細(xì)胞實(shí)驗(yàn)外包代做或關(guān)于細(xì)胞實(shí)驗(yàn)有相關(guān)的技術(shù)問題需要咨詢的話歡迎給咱們留言，細(xì)胞平臺的技術(shù)小哥哥姐姐非常樂意給大家進(jìn)行技術(shù)上的交流與科研上的協(xié)助！

那我們下期見~

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