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ELISA實驗注意事項

2024-09-06 15:43:46

來源/作者:普拉特澤-生物醫(yī)學整體課題外包平臺

    ELISA實驗操作注意事項由普拉特澤生物為大家總結(jié)分享,普拉特澤生物表達檢測實驗平臺專業(yè)承接實時熒光定量PCR實驗外包、DNA甲基化檢測等表達檢測實驗代做服務,積累專業(yè)豐富的實驗操作經(jīng)驗。那今天咱們就為大家專門出一期ELISA實驗的注意事項,快點學起來吧!

ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗)是一種常用的生物化學檢測技術(shù),廣泛應用于醫(yī)學、生物學、食品科學等領(lǐng)域。由于ELISA實驗過程復雜且對條件要求嚴格,因此在進行實驗時需要注意多個方面以確保結(jié)果的準確性和可靠性。以下是ELISA實驗過程中需要特別注意的幾個方面。

一、實驗前準備

1. 試劑檢查與配制

①試劑檢查:實驗前務必對試劑盒進行仔細檢查,包括生產(chǎn)日期、批號、有效期等,確保試劑盒在有效期內(nèi)使用。

②試劑配制:嚴格按照試劑盒說明書進行試劑配制,包括抗體、酶標抗體、底物等,避免出現(xiàn)濃度誤差或污染。配制好的試劑應存放于4℃冰箱中,并盡快使用,避免反復凍融。

2. 實驗器材準備

①移液槍:保證移液槍的準確性,誤差不能超過2%??捎盟碗娮犹炱竭M行確定,但最好有專業(yè)人員進行矯正。

②槍頭:要配備20ul、50ul、100ul、1000ul和排槍各一支。吸取不同的液體后,要更換槍頭,即使是吸取標準品時也要更換,以避免交叉污染。


3. 試劑盒及樣本處理

①試劑盒取出:在實驗前1小時將試劑盒從冰箱中取出,使各種試劑都恢復到室溫,以使結(jié)果更穩(wěn)定。

②樣本處理:待檢樣品要澄清,避免渾濁或懸浮物影響實驗結(jié)果。對于細胞培養(yǎng)上清、血清、血漿等樣本,需要按照規(guī)定的方法進行收集和保存,確保樣本的新鮮度和活 性。

二、實驗過程注意事項

1. 液體吸取與加樣

速度控制:用槍吸取液體時速度不能太快,以免產(chǎn)生氣泡而使吸取量不準確。

量程選擇:吸取液體時,要用量程和需要量接近的槍去吸,以減少誤差。

加樣操作:將液體加到酶標孔中時,避免槍頭和孔內(nèi)液體接觸,可使槍頭上的液滴和孔壁接觸,液滴會自然流下去。

2. 孵育與溫浴

孵育條件:震蕩孵育可以加快抗原抗體之間的相互接觸,使反應更加充分。水浴溫度應保持在37℃,且水浴需要封閉以防止污染。

溫浴時間:溫浴時間應嚴格遵守試劑盒規(guī)定,以確保反應充分進行。

3. 洗板與顯色

洗板操作:洗板時,每次洗液加入后,應靜置1-2分鐘,使清洗更加徹底。沒有洗板機時,倒去液體后,要將酶標板在報紙或毛紙上用力拍干。

顯色控制:顯色需控制好時間,根據(jù)說明書操作。時間過短會導致結(jié)果偏低,時間過長則可能導致空白增高或非特異性顯色增加。

4. 底物與終止液

底物配制:底物是光敏感的,要在臨用前現(xiàn)配,避免長時間光照導致失效。

毒性防護:底物有一定的毒性,終止液對皮膚有腐蝕性,應盡量避免接觸。

三、實驗后處理與數(shù)據(jù)分析

1. 酶標儀使用

①預熱:檢測前,要打開酶標儀,使之穩(wěn)定10分鐘以上,以獲得更穩(wěn)定的結(jié)果。

②波長選擇:在讀數(shù)過程中,應選擇適宜的波長和時間進行檢測,并使用配套的儀器設備進行數(shù)據(jù)分析。

2. 數(shù)據(jù)處理與驗證

①雙孔實驗:應盡量做雙孔實驗,以保證數(shù)據(jù)的準確性。

②結(jié)果驗證:對結(jié)果有疑問的樣品要用其它方法進行確證,以確保結(jié)果的可靠性。


四、總結(jié)

ELISA實驗過程復雜且對條件要求嚴格,因此在進行實驗時需要注意多個方面。從實驗前的試劑檢查、器材準備到實驗過程中的液體吸取、孵育、洗板、顯色等環(huán)節(jié),都需要嚴格遵守操作規(guī)程和注意事項。只有這樣,才能確保實驗結(jié)果的準確性和可靠性,為科學研究和臨床應用提供有力的支持。

 OK!那么ELISA實驗注意事項我們就分享到這里啦,想學習更詳細的實驗操作步驟的同學歡迎點擊我們的春風學院——《ELISA酶聯(lián)免疫吸附實驗理論與操作演示專欄繼續(xù)學習哦,當然如果您有ELISA實驗外包的需求,普拉特澤隨時在在線任君采擷哦!


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