HE染色實驗問題答疑【附視頻教程】
2022-06-17 15:48:00
來源/作者：普拉特澤-病理染色技術平臺
大家好！HE染色實驗問題答疑由普拉特澤生物為大家總結分享，文末附有HE染色視頻供大家學習。HE染色作為病理觀察最常見的染色實驗，雖然普遍但新手村實驗員們也總容易有各種稀奇古怪的問題，普拉特澤生物病理實驗平臺今天就給大家統(tǒng)一回答！
Q1：紅藍失調怎么辦？
A：(1)偏藍色：蘇木素染色過深，分化不夠；伊紅試劑過期；伊紅染色時間太短，分化過度。
(2)偏紅色：蘇木素染色過淺，分化過度；組織固定不佳，細胞核不著色；脫蠟不徹底，蘇木素染不上；蘇木素氧化成熟不夠；伊紅染色過深，分化不足。
Q2：細胞核染色過淺，顏色暗淡怎么辦？
A：造成這種情況的原因是切片在蘇木素染液中停留過短，或蘇木素過度氧化失效，或分化時間太長。
解決辦法：重新染色。將組織切片放入0.01%氫氧化鈉、0.5%氨水、飽和的碳酸氫鈉溶液、乙醇溶液，每個3-5 min即可，接著重新染色。適當增加組織的嗜堿性以增強核染色，如Zenker液固定的切片可放入5%碳酸氫鈉溶液中3 h，自來水沖洗5-10 min染色，或Bouin液固定的切片可放入5%碳酸氫鈉溶液中1h，自來水沖洗10 min染色。
Q3：染色時切片脫落的原因以及應對措施
A：(1)血栓、壞死或硬度較大的組織本身在染色時就極易脫落，應小心操作。
(2)組織脫水、透明不佳，石蠟未完全滲入，脫蠟時組織收縮，復水時組織又吸水膨脹，造成脫片；還可能是組織脫水、透明過度，且浸蠟溫度過高，導致組織變硬變脆，既不容易切片也極易在染色過程中脫片。對策：發(fā)脆發(fā)硬的組織可用棉簽蘸5%氨水或2%冰醋酸溶液涂抹在組織表面10-15秒。然后精修出組織面，放入冰水混合物中泡1 min，再切片。
(3)切片太厚；切片破碎，不整齊；展片時水溫過低，展片不充分導致組織與玻片貼合不緊密；烤片時間和溫度過短過低，或過久過高，一般使用防脫玻片烤片僅需30 min即可。
(4)染色前入水步驟不夠，組織吸水后快速膨脹，導致脫片;染色過程中漂洗粗暴，振蕩過度;反藍時間太久，反藍液堿性過強，可以采用自來水反藍，一般自來水PH7.5-7.8，效果很好。
(5)1%鹽酸乙醇分化時脫片。分化的原理是利用鹽酸電離出的氫離子，改變組織表面電荷，使得吸附的染料脫落。由此看來，乙醇的作用并不大。并且分化液中的乙醇會使組織快速脫水而收縮，在隨后漂洗時組織又快速吸水膨脹，極易脫片。因此完全可以改用1%鹽酸水溶液作為分化液。
Q4：成片的染色模糊不清，灰染
A：(1)組織未及時固定，部分自溶;或固定不佳，深部組織未處理到。這種只能重新固定了。
(2)盡管乙醇也是一種固定液，但盡量少用或不用，因為其會導致組織發(fā)硬變脆，染色效果不好。
(3)包埋時蠟的溫度過高，或切片后烤片時間和溫度過久過高都不好，可能會導致無法染色。
(4)脫蠟不徹底；染料有問題;分化過度導致的顏色變淡，鏡下組織界限不清；染完后的脫水和透明不佳，水霧殘留在組織上。
(5)通風窗中(防止空氣中的水霧)，戴口罩操作封片(減少哈氣帶來的水霧)。
Q5：不管怎么操作，始終無法染色或淡染
A：這種情況一般因為組織固定時采用了酸性甲醛；或者組織在甲醛中浸泡時間太長；或者久置的甲醛變性分解為甲酸。
補救：防患于未然，要么使用新鮮的中性甲醛固定，要么在存放的甲醛中加一點碳酸鈉中和甲酸。對于已經固定的組 織可考慮再次固定；對于已經制出的片子，染色前采用5%重鉻酸鉀溶液浸泡半小時以上，然后自來水漂洗5min，可改善染色。也可以將切片放入3%硫酸鐵銨溶液中，補充染色媒介，增強蘇木素與組織的親和力(蘇木素染色必須要媒介才能染上，單純的蘇木素與組織的親和力很弱)。
Q6：染色前烤片溫度、時間對HE染色的影響？
A：肯定有影響。最佳時間是60℃，25min即可?？苫顒又?/span>60-75℃，25-30min。
Q7：可以把HE切片洗去做其他染色嗎？
A：可以，這種情況一般適用于組織量較少，或較珍貴時操作。
好啦，HE染色實驗的問題答疑就解釋到這里啦！還有什么不明白的可以留言技術會一一詳細解釋的哦。想跟深入視頻學習的點擊：《HE染色理論+實操》
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