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        今天普拉特澤生物跟大家一起學(xué)習(xí)的是科研病理檢測(cè)和臨床實(shí)驗(yàn)室檢查當(dāng)中非常重要的技術(shù)——免疫組化/IHC操作步驟，文末附有免疫組化理論與實(shí)驗(yàn)操作的視頻教程，大家可以自行學(xué)習(xí)。普拉特澤生物——病理實(shí)驗(yàn)平臺(tái)專業(yè)承接免疫組化/IHC實(shí)驗(yàn)服務(wù)，為廣大科研工作者或者科研小白提供專業(yè)可靠的幫助。

                          

        上文的免疫組化介紹中咱們講到了，在預(yù)測(cè)免疫組化在良惡性腫瘤的組織細(xì)胞學(xué)起源、判別轉(zhuǎn)移癌的起源部位、某些病理的亞型分類、腫瘤個(gè)體化治療、腫瘤的預(yù)后判斷都有一定的指導(dǎo)意義，那么這么重要的實(shí)驗(yàn)，步驟是不是很難呢，來看看吧~

        一、免疫組化實(shí)驗(yàn)器材準(zhǔn)備

        生化培養(yǎng)箱、微波爐、生物組織攤烤機(jī)、冰箱、顯微鏡、蓋玻片、載玻片、無(wú)水乙醇、雙氧水、中性樹膠、二甲苯、蘇木素、PBS緩沖粉、檸檬酸緩沖液、鼠兔通用試劑盒、顯色試劑盒

        二、免疫組化實(shí)驗(yàn)原理

        抗原抗體反應(yīng)，即抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色來確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原（多肽和蛋白質(zhì)），對(duì)其進(jìn)行定位、定性及相對(duì)定量。

        三、免疫組化實(shí)驗(yàn)步驟

        1、60℃烤片30~60 min；

        2、切片脫蠟水化：先將切片置于二甲苯中10 min，2次。然后依次在100%，95%，85%和75%乙醇，每級(jí)放置5-10 min。再用蒸餾水浸洗5 min；

        3、加入3%H2O2，室溫10 分鐘以滅活內(nèi)源性酶。PBS沖洗3 min x 3次；

        4、熱修復(fù)抗原：將切片浸入檸檬酸鹽緩沖液（pH6.0）,微波爐高火加熱8min后拿出，冷卻至室溫。冷卻后0.01M PBS（pH7.2~7.6）洗滌3 min x 3次；

        5、血清封閉：切片滴加5%羊血清放入濕盒中，室溫20min。PBS洗滌3min×3次；

        6、孵育一抗：滴加適當(dāng)稀釋的一抗，對(duì)照組滴加等量PBS，4℃冰箱過夜；

        7、孵育二抗：將載玻片從冰箱中取出，37℃溫箱復(fù)溫30min；用PBS沖洗5 min x 3次；滴加50~100 μL二抗，37℃溫箱孵育30 min；PBS沖洗5 min x 3次；

        8、標(biāo)記：滴加HRP標(biāo)記鏈霉親和素，37℃溫箱孵育20 min；

        9、DAB顯色：將片子從溫箱中取出，PBS沖洗5 min x 3次；滴加預(yù)制好的顯色劑DAB工作液50~100 μL，室溫孵育1-5 min， 鏡下控制反應(yīng)時(shí)間；

        10、復(fù)染：將顯色后的片子蒸餾水洗滌，浸泡于蘇木素中復(fù)染1-3 min，蒸餾水沖洗，PBS返藍(lán)；

        11、脫水：各級(jí)酒精（60-100%）脫水，每級(jí)5 min；

        12、透明：取出后置于二甲苯10 min，2次；

        13、封片：中性樹膠封片、顯微鏡觀察。

        好了，免疫組化的完整實(shí)驗(yàn)步驟就到這里了！想更深了解免疫組化的同學(xué)可以點(diǎn)擊《免疫組化理論+實(shí)操》視頻學(xué)習(xí)，需要免疫組化實(shí)驗(yàn)外包的同學(xué)歡迎留言，我們會(huì)第一時(shí)間給到咨詢回復(fù)。