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今天，我們來著眼于國自然熱點(diǎn)-表觀遺傳調(diào)控相關(guān)的文獻(xiàn)，主題方向是RNA甲基化。

那什么是RNA甲基化呢？

RNA甲基化是指在甲基轉(zhuǎn)移酶的催化下，RNA的甲基腺嘌呤被選擇性地添加甲基基團(tuán)的化學(xué)修飾現(xiàn)象，主要形式為m6A甲基化。m6A甲基化修飾是可逆化的，包括甲基化轉(zhuǎn)移酶（Writers）、去甲基化酶（Erasers）和甲基化閱讀蛋白（Readers）等共同參與。與人類的發(fā)育，免疫，腫瘤生成和轉(zhuǎn)移，干細(xì)胞更新，脂肪分化等過程息息相關(guān)，因此，RNA甲基化已成為科研中一個(gè)重要且熱門的研究方向。

接著，我們來了解下RNA甲基化現(xiàn)在的研究行情~~

先從pubmed分析一下RNA甲基化這一熱點(diǎn)問題的研究情況吧！在pubmed數(shù)據(jù)庫中輸入“RNA Methylation”，文章數(shù)量為44095篇，并在近10年來研究勢(shì)頭居高不下。

從國自然立項(xiàng)情況來看，近十年來，立項(xiàng)項(xiàng)目的數(shù)目也一直在穩(wěn)步增長的狀態(tài)。

既然m6A甲基化熱度不減。

那么，究竟如何檢測(cè)m6A？

整體思路如何設(shè)計(jì)？

我們跟著今天介紹的這篇SCI一起來學(xué)習(xí)學(xué)習(xí)吧。

文獻(xiàn)題目是：Methyl CpG binding protein 2 promotes colorectal cancer metastasis by regulating N6-methyladenosine methylation through methyltransferase-like 14. 影響因子6.711分，剛剛熱乎乎的發(fā)表在Cancer science雜志上。主要研究MeCP2與甲基轉(zhuǎn)移酶14（METTL14）結(jié)合，通過改變m6A甲基化修飾來調(diào)節(jié)腫瘤抑制因子KLF4的表達(dá)，進(jìn)而影響結(jié)直腸癌的進(jìn)展。

接下來我們跟著作者的思路一起來看看吧!

一、MeCP2基因在結(jié)直腸癌（CRC）臨床樣本中的研究。

作者首先用WB和IHC方法發(fā)現(xiàn)了MeCP2蛋白在癌旁組織中的表達(dá)顯著高于正常組織（Figure 1A - 1C），同時(shí)MeCP2 mRNA表達(dá)的升高與預(yù)后較差相關(guān)（Figure 1D），TCGA數(shù)據(jù)總生存率分析亦顯示高MeCP2表達(dá)與預(yù)后較差呈正相關(guān)（Figure 1E）。以上結(jié)果說明：CRC腫瘤樣本中MeCP2表達(dá)增加，與預(yù)后差相關(guān)，MeCP2可能是CRC的致癌基因。

二、MeCP2促進(jìn)CRC的轉(zhuǎn)移、減弱CRC細(xì)胞的m6A水平

為了進(jìn)一步確定MeCP2在CRC中的生物學(xué)作用，作者在HT29、HCT8和SW620細(xì)胞中敲低了MeCP2基因（Figure 2A and 2B），HCT116、RKO、DLD1細(xì)胞中過表達(dá)MeCP2基因（Figure 2E and 2F）。Transwell實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，敲低MeCP2后，細(xì)胞的侵襲和遷移能力顯著降低（Figure 2C and 2D），相反，過表達(dá)MeCP2后，細(xì)胞的侵襲和遷移能力顯著提高（Figure 2G and 2H）。m6A斑點(diǎn)實(shí)驗(yàn)和免疫組化實(shí)驗(yàn)顯示敲低MeCP2基因后細(xì)胞m6A整體水平顯著上調(diào)（Figure 2I and 2J）。相反，過表達(dá)MeCP2后，細(xì)胞整體m6A水平顯著下調(diào)（Figure 2K and 2L）。綜上，MeCP2抑制CRC細(xì)胞的m6A水平。

三、MeCP2與m6A甲基轉(zhuǎn)移酶METTL14相互作用

既然MeCP2與m6A有關(guān)，那么是哪一個(gè)m6A相關(guān)的基因與其存在相互作用呢？作者的COIP和WB實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)MeCP2僅與METTL14存在相互作用，而與其他m6A相關(guān)酶無互作（Figure 3A -3D）。但是MeCP2、METTL14和METTL3之間存在比較復(fù)雜的相互作用（Figure 3E）。之后WB實(shí)驗(yàn)證實(shí)，在293T細(xì)胞中，METTL14截?cái)嗟鞍着cMeCP2和METTL3相互作用的較低（Figure 3F）。

作為一種內(nèi)在紊亂的蛋白，MeCP2不能形成穩(wěn)定的二級(jí)結(jié)構(gòu)。作者猜測(cè)，這是這種結(jié)構(gòu)的靈活性使MeCP2能夠與METTL14相互作用。而接下來的免疫熒光實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)顯示MeCP2和METTL14在細(xì)胞核內(nèi)重合（Figure 3G）。同時(shí)，MeCP2的過表達(dá)影響METTL3的蛋白表達(dá)水平，但是卻不影響其轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)（Figure 3H and 3I）。

綜上，這些結(jié)果有力地證實(shí)了MeCP2對(duì)RNA甲基化的影響依賴于MeCP2和METTL14之間的相互作用。

四、METTL14抑制CRC的轉(zhuǎn)移

有研究表明，METTL14可以抑制結(jié)腸直腸癌的腫瘤轉(zhuǎn)移。故，作者重點(diǎn)研究METTL14在CRC進(jìn)展和腫瘤發(fā)生中的作用。首先，TCGA數(shù)據(jù)總體生存率分析發(fā)現(xiàn)低METTL14的表達(dá)與預(yù)后較差有關(guān)（Figure 4A）。在HCT116和RKO細(xì)胞中穩(wěn)定敲低METTL14后，MeCP2的蛋白和mRNA水平并沒有明顯的改變（Figure 4B - 4D），而METTL3的蛋白水平顯著降低（Figure 4B and 4C）。Transwell實(shí)驗(yàn)證實(shí)表觀遺傳RNA甲基化 - 知乎 (zhihu.com)