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今天普拉特澤給大家介紹一個(gè)新的實(shí)驗(yàn)——彗星實(shí)驗(yàn)（單細(xì)胞凝膠電泳實(shí)驗(yàn)）。彗星實(shí)驗(yàn)介紹由普拉特澤生物細(xì)胞實(shí)驗(yàn)平臺(tái)為大家總結(jié)分享，文末附有彗星實(shí)驗(yàn)的視頻教程供大家學(xué)習(xí)，一起來看看吧。

彗星實(shí)驗(yàn)，亦稱單細(xì)胞凝膠電泳實(shí)驗(yàn)。是指一種通過檢測(cè)DNA鏈損傷判斷遺傳毒性的技術(shù)，是一種在單細(xì)胞水平檢測(cè)DNA損傷程度的方法。在載玻片上用少量瓊脂糖凝膠包埋單個(gè)分散細(xì)胞，細(xì)胞經(jīng)裂解、解旋和電泳后，斷裂的DNA在電場(chǎng)力作用下向陽極移動(dòng)，經(jīng)熒光染料染色，在熒光顯微鏡下觀察彗星樣圖像。

彗星實(shí)驗(yàn)是一種有效評(píng)估DNA損傷的方法。其原理是器官或組織經(jīng)處理（如輻射、重金屬等）后，細(xì)胞中的DNA發(fā)生單鏈或雙鏈斷裂，經(jīng)細(xì)胞及其核膜裂解后，DNA解旋，在電場(chǎng)作用下，DNA 斷片遷移出細(xì)胞核，形成彗星狀的電泳圖譜。

它能有效地檢測(cè)并定量分析細(xì)胞中DNA單、雙鏈缺口損傷的程度。當(dāng)各種內(nèi)源性和外源性DNA損傷因子誘發(fā)細(xì)胞DNA鏈斷裂時(shí)，其超螺旋結(jié)構(gòu)受到破壞，在細(xì)胞裂解液作用下，細(xì)胞膜、核膜等膜結(jié)構(gòu)受到破壞，細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、RNA以及其他成分均擴(kuò)散到細(xì)胞裂解液中，而核DNA由于相對(duì)分子質(zhì)量太大只能留在原位。在中性條件下，DNA片段可進(jìn)入凝膠發(fā)生遷移，而在堿性電解質(zhì)的作用下，DNA發(fā)生解螺旋，損傷的DNA斷鏈及片段被釋放出來。由于這些DNA的相對(duì)分子質(zhì)量小且堿變性為單鏈，所以在電泳過程中帶負(fù)電荷的DNA會(huì)離開核DNA向正極遷移形成彗星狀圖像，而未受損傷的DNA部分保持球形。

DNA受損越嚴(yán)重，產(chǎn)生的斷鏈和斷片越多，長(zhǎng)度也越小，在相同的電泳條件下遷移的DNA量就越多，遷移的距離就越長(zhǎng)。通過測(cè)定DNA遷移部分的光密度或遷移長(zhǎng)度就可以測(cè)定單個(gè)細(xì)胞DNA損傷程度，從而確定受試物的作用劑量與DNA損傷效應(yīng)的關(guān)系。該法對(duì)檢測(cè)低濃度遺傳毒物具有高靈敏性，有研究的細(xì)胞不需處于有絲分裂期，而且只需要少量細(xì)胞的優(yōu)點(diǎn)。

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