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細(xì)胞增殖檢測方法匯總【附視頻教程】

2022-07-05 16:29:23

來源/作者:普拉特澤-生物醫(yī)學(xué)整體課題外包平臺

        細(xì)胞增殖檢測方法匯總由普拉特澤生物細(xì)胞實(shí)驗(yàn)平臺總結(jié)分享,文末附上細(xì)胞增殖檢測視頻教程供大家復(fù)盤學(xué)習(xí)。上篇我們介紹了什么是細(xì)胞增殖,簡單梳理了一下細(xì)胞增殖的有絲分裂、無絲分裂、減數(shù)分裂三種分裂形式,忘記了回去復(fù)習(xí)哦,今天實(shí)驗(yàn)平臺的技術(shù)為大家總結(jié)的是細(xì)胞增殖檢測的實(shí)驗(yàn)方法。

         細(xì)胞增殖檢測法(一):直接計數(shù)法

         這是一種非常簡單的檢測方法,我們可以利用計數(shù)板或技術(shù)儀得出細(xì)胞數(shù)目然后對數(shù)目進(jìn)行比較即可。其缺點(diǎn)是不適合評估特定亞群、和數(shù)量較多的細(xì)胞計數(shù)。

         細(xì)胞增殖檢測法(二):直接Brdu/EdU檢測法

          Brdu中文全名5-溴脫氧尿嘧啶核苷,為胸腺嘧啶的衍生物,可代替胸腺嘧啶在DNA合成期(S期),活體注射或細(xì)胞培養(yǎng)加入,而后利用抗Brdu單克隆抗體,ICC染色,顯示增殖細(xì)胞。同時結(jié)合其它細(xì)胞標(biāo)記物,雙重染色,可判斷增殖細(xì)胞的種類,增殖速度,對研究細(xì)胞動力學(xué)有重要意義。

          細(xì)胞增殖檢測法(三):直接MTT檢測法

          MTT檢測法主要反映細(xì)胞的能量代謝,是檢測細(xì)胞增殖活力的一種簡便準(zhǔn)確的方法,其原理是在活細(xì)胞生長和增殖過程中,線粒體內(nèi)的脫氫酶可將黃色的MTT分解成蘭紫色的甲(Formazan),生成的甲瓚的多少與細(xì)胞的數(shù)量和細(xì)胞的活力成正比。

          細(xì)胞增殖檢測法(四):CCK-8檢測法

          CCK-8就是MTT的升級版,CCK-8細(xì)胞活性檢測試劑中含有WST-8——一種類似于MTT的化合物,在電子耦合試劑存在的情況下,可以為線粒體內(nèi)的脫氫酶驗(yàn)明正身,在脫氫酶作用下,還原生成橙黃色的甲瓚產(chǎn)物。細(xì)胞增殖越多越快,則顏色越深;細(xì)胞毒性越大,則顏色越淺。對于同樣的細(xì)胞,顏色的深淺和細(xì)胞數(shù)目呈線性關(guān)系。用酶聯(lián)免疫檢測儀在450nm波長處測定其光吸收值,可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。

          細(xì)胞增殖檢測法(五):直接3H-TdR滲入法

          胸腺嘧啶核苷(TdR)是DNA特有的堿基,也是DNA合成的必需物質(zhì)。用同位素3H標(biāo)記TdR3H-TdR作為DNA合成的前體能摻入DNA合成代謝過程,那之后的每一條新合成的DNA雙鏈像被安裝了GPS定位器一樣,都能被液體閃爍計數(shù)器檢測到,通過測定細(xì)胞的放射性強(qiáng)度,可以反映細(xì)胞DNA的代謝及細(xì)胞增殖情況。優(yōu)點(diǎn):3H-TdR摻入法敏感性高,客觀性強(qiáng),重復(fù)性好。缺點(diǎn):需一定設(shè)備條件:液體閃爍計數(shù)器,這玩意不便宜,同時還存在放射性核素污染問題,真是傷錢包又傷身體。

          細(xì)胞增殖檢測法(六):核抗原Ki‐67染色法

           Ki-67染色,研究人員可以評估處于細(xì)胞周期所有活躍期的總增殖細(xì)胞的百分比??蒲腥藛T可以借此觀察藥物或未知化合物的刺激效應(yīng)或抗增殖效應(yīng)??捎妹庖呓M織化學(xué)技術(shù)或流式細(xì)胞術(shù)檢測。

          細(xì)胞增殖檢測法(七):CFSE檢測法

           羥基熒光素二醋酸鹽琥珀酰亞胺脂(CFSE)是一種可穿透細(xì)胞膜的熒光染料,可以不可逆地與細(xì)胞內(nèi)的氨基結(jié)合偶聯(lián)到細(xì)胞蛋白質(zhì)上,是一種良好的細(xì)胞標(biāo)記物。其檢測法原理:CFSE進(jìn)入細(xì)胞后,可以不可逆地與細(xì)胞內(nèi)的氨基結(jié)合偶聯(lián)到細(xì)胞蛋白質(zhì)上。當(dāng)細(xì)胞分裂時,CFSE標(biāo)記熒光可平均分配至兩個子代細(xì)胞中,因此其熒光強(qiáng)度是在親代細(xì)胞的一個增殖的細(xì)胞群中,各連續(xù)代細(xì)胞的熒光強(qiáng)度呈對遞減,利用流式細(xì)胞儀在488nm激發(fā)光和熒光檢測通道可對其進(jìn)行分析。

           好啦,那檢測細(xì)胞增殖的實(shí)驗(yàn)方法我們就介紹到這里啦,視頻學(xué)習(xí)點(diǎn)擊《細(xì)胞實(shí)驗(yàn)》如果你還知道更多檢測細(xì)胞增殖的方法歡迎留言,我們會一個一個補(bǔ)充上的哦,有需要細(xì)胞增殖檢測的老師也請一定要選擇普拉特澤生物!




        

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