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  細胞運動實驗包括體內(nèi)實驗和體外實驗，體內(nèi)實驗一般包括皮下移植瘤和原位移植瘤，我們之前已經(jīng)發(fā)過裸鼠成瘤的相關(guān)文章，那我們今天呢主要想給大家分享的是體外實驗。

細胞運動的體外實驗常用方法有：劃痕實驗、侵襲實驗、趨化實驗。

劃痕實驗

細胞劃痕法是測定了腫瘤細胞的運動特性的方法之一。在體外培養(yǎng)的單層細胞上，劃痕致傷，然后在加入藥物等實驗條件下觀察其對腫瘤細胞遷移的影響。

侵襲實驗

案例分享

transwell侵襲實驗，其實原理簡單地說就是用一層膜將高營養(yǎng)的培養(yǎng)液和低營養(yǎng)的培養(yǎng)液隔開，細胞放在低營養(yǎng)的培養(yǎng)液里，為了找吃的，細胞會往高營養(yǎng)的培養(yǎng)液里面跑，但是有膜擋著，所以要穿過膜才行。在膜上涂上一層基質(zhì)膠，模仿細胞外基質(zhì)，于是細胞要把基質(zhì)消化了才可以從低營養(yǎng)的培養(yǎng)液跑到高營養(yǎng)的培養(yǎng)液里面，最后我們檢測高營養(yǎng)的培養(yǎng)液里細胞量就可以知道細胞的侵襲能力了。

實驗步驟

（1）Matrigel在4℃過夜融化；?

（2）用4℃預(yù)冷的無血清培養(yǎng)基稀釋Matrigel至終濃度1 mg/mL，冰上操作；

（3）在chamber上室底部中央垂直加入100 μL稀釋后的Matrigel，37℃溫育4－5小時使其干成膠狀；

（4）待測細胞培養(yǎng)至對數(shù)生長期，消化細胞，用PBS和無血清培養(yǎng)基先后洗滌一次，用無血清培養(yǎng)基懸浮細胞，計數(shù)。

（5）在下室（即24孔板底部）加入含10％血清的培養(yǎng)基，上室加入細胞懸液，繼續(xù)在孵箱培養(yǎng)24小時；

（6）用鑷子小心取出chamber，吸干上室液體，移到預(yù)先加入約800 μL甲醇的孔中，室溫固定30分鐘；

（7）取出chamber，吸干上室固定液，移到預(yù)先加入約800 μL?Giemsa染液的孔中，室溫染色15－30分鐘；

（8）用小鑷子小心揭下膜，底面朝上晾干，移至載玻片上用中性樹膠封片；

（9）顯微鏡下取9個隨機視野計數(shù)，統(tǒng)計結(jié)果。

注意事項

（1）Matrigel在過高或過低的溫度均易凝固，因此操作所需槍頭和離心管應(yīng)提前在4℃預(yù)冷；

（2）鋪膠時保證液面水平，膠的厚度均勻一致，切勿產(chǎn)生氣泡；

（3）為了避免操作污染，每次實驗可預(yù)先另準備一塊24孔普通培養(yǎng)板；

（4）細胞懸液加入膜中央，盡量保證液面水平；

（5）Chamber和膜上都無法標(biāo)記，操作時應(yīng)小心避免混淆實驗組和對照組；

（6）充分晾干，避免殘留水分導(dǎo)致鏡下聚焦不一致；

（7）小室內(nèi)邊緣殘留的細胞會影響實驗結(jié)果，用棉棒擦干。

趨化實驗

趨化性（Chemotaxis，亦被稱為化學(xué)趨向性）是趨向性的一種，指身體細胞、細菌及其他單細胞、多細胞生物依據(jù)環(huán)境中某些化學(xué)物質(zhì)而趨向的運動。適于分析在基質(zhì)膠中快速或緩慢遷移的非貼壁細胞的趨化性反應(yīng)，例如淋巴細胞，在間質(zhì)流的腫瘤細胞和內(nèi)皮細胞的化學(xué)趨向性。正趨化性指趨向較高化學(xué)物質(zhì)濃度的運動，而負趨化性則相反。

上室細胞可穿過聚碳酸酯膜進入下室的細胞量可反映下室成分對上室細胞的趨化能力。

（1）細胞B對細胞A的趨化作用：將細胞A種于上室，細胞B種于下室，可以研究細胞B分泌或代謝產(chǎn)生的物質(zhì)對細胞A的趨化作用。

（2）趨化因子對細胞的趨化作用：將細胞種于上室，下室加入某種趨化因子，可研究該趨化因子對細胞的趨化作用。

為了便于大家更直觀地了解這三種實驗，我們做了一個小表格。

那關(guān)于細胞運動實驗就介紹到這了，如果還有其他想了解的實驗細節(jié)歡迎大家來留言咨詢或討論哦。