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        今天普拉特澤生物跟大家一起學(xué)習(xí)的就是——EDU法檢測細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)操作步驟。細(xì)胞增殖的能力是評價(jià)細(xì)胞、代謝、生理、病理狀況、細(xì)胞活性、基因毒性等的重要指標(biāo)之一，上兩篇我們學(xué)習(xí)了最常用的cck8法和MTT法檢測細(xì)胞增殖，今天一起來看看EDU法如何進(jìn)行細(xì)胞增殖的檢測吧

細(xì)胞增殖檢測之MTT法【附視頻教程】
cck8法檢測細(xì)胞增殖詳細(xì)操作步驟【附視頻教程】

        EdU可以說是一款革命性的細(xì)胞增殖狀態(tài)檢測方法與傳統(tǒng)的免疫熒光染色(BrdU)檢測方法相比，EdU只有BrdU抗體大小的1/500，在細(xì)胞內(nèi)更容易擴(kuò)散，不需要嚴(yán)格的樣品變性(酸解、熱解、酶解)處理，有效地避免了樣品損傷，有助于在組織、器官的整體水平上觀測細(xì)胞增殖的真實(shí)情況，具有更高的靈敏度和更快的檢測速度。

        EDU檢測細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)詳細(xì)操作步驟如下：

        一、首先用EdU來標(biāo)記細(xì)胞

        細(xì)胞，如果使用其它類型的細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)可能需要做調(diào)整。建議EdU起始濃度是10mM，或者根據(jù)細(xì)胞類型設(shè)置幾個梯度預(yù)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，再進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)。

        1.在六孔板里的蓋玻片上培養(yǎng)細(xì)胞，使其生長至所需密度后處理細(xì)胞;

        2.用10mM EdU溶液在無血清培養(yǎng)基中制備2xEdU工作溶液;

        3.預(yù)熱2x EdU溶液，然后將2xEdU溶液添加到等體積含有實(shí)驗(yàn)細(xì)胞的培養(yǎng)基中，獲得1xEdU溶液。例如，對于zui終濃度為10M的溶液，可用20MEdu注意：建議不要更換所有的培養(yǎng)基，因?yàn)檫@會影響細(xì)胞增殖速率;將處理好的細(xì)胞孵育12小時(shí);孵育完成后立即進(jìn)行下一步。

        二、細(xì)胞固定和透化

        1,孵育后除去培養(yǎng)基，并向每個含有蓋玻片的孔中加入2.5mL含多聚甲醛的 PBS，室溫下孵育15分鐘;

        2.除去固定液，用2.5mLPBS洗滌孔中的細(xì)胞5分鐘，重復(fù)三遍;

        3.除去洗滌液，然后向前五個孔中加入2.5mL通透液，室溫下孵育20分鐘:

        4.除去通透緩沖液，用2.5mLPBS洗滌每個孔中的細(xì)胞兩次，除去洗滌液;

        5.立即進(jìn)入步驟C。

        三、 EdU檢測

        每孔使用100L反應(yīng)混合物。反應(yīng)混合物體積可根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行調(diào)節(jié)，但必須按比例加入反應(yīng)組分。

        1.制備 Click-iT 反應(yīng)混合物。注意要按表中列出的順序添加成分，否則反應(yīng)將無法得到 zui佳效果。配置好的Click-iT反應(yīng)混合物必須在15分鐘內(nèi)使用。

        2.向每個玻片上加入100Click-iT反應(yīng)混合物，室溫下避光孵育30分鐘;

        3.除去反應(yīng)混合物，用2.5 mLPBS洗滌每孔一次后，除去洗滌液;

        可選擇步驟:進(jìn)行核染色(DAPl或Hoechst33342)或抗體標(biāo)記

        提示：在孵育過程中一定要避光。如不需要其它染色，孵育后請直接進(jìn)行成像和分析

        好啦，那EDU檢測細(xì)胞增殖的操作步驟我們就介紹到這里啦，需要細(xì)胞增殖檢測實(shí)驗(yàn)外包或還有更多不懂的歡迎留言，技術(shù)免費(fèi)為大家答疑解惑~我們下期見！