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ELISA的實(shí)驗(yàn)報(bào)告(一)

2024-08-29 18:40:59

來源/作者:普拉特澤-生物醫(yī)學(xué)整體課題外包平臺

    普拉特澤為大家詳細(xì)分享ELISA的實(shí)驗(yàn)報(bào)告,同時(shí)為廣大科研工作者開展ELISA實(shí)驗(yàn)的線上的理論培訓(xùn)與線下實(shí)操,可承接ELISA實(shí)驗(yàn)外包服務(wù)

一、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>

通過Elisa實(shí)驗(yàn)技術(shù)檢測各樣本中目的蛋白的表達(dá)。

二、 實(shí)驗(yàn)樣本

一、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

    1. 標(biāo)準(zhǔn)品檢測值

    2. 標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)曲線

1  Rat IL-4標(biāo)準(zhǔn)曲線

   標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)果顯示,本次IL-4檢測結(jié)果可信。

3.樣品檢測結(jié)果

圖2  Elisa檢測柱狀圖

一、 ELISA實(shí)驗(yàn)原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大鼠白細(xì)胞介素4IL-4)水平。用純化的大鼠白細(xì)胞介素4IL-4)捕獲抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被的微孔中依次加入大鼠白細(xì)胞介素4IL-4),再與HRP標(biāo)記的檢測抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMBHRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠白細(xì)胞介素4IL-4)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中大鼠白細(xì)胞介素4IL-4)含量。

四、 實(shí)驗(yàn)通用儀器及試劑

1. 主要儀器

2.主要試劑

一、 實(shí)驗(yàn)步驟

3.1 樣品處理

浸提液我司提供。

3.2 ELISA檢測步驟(以試劑盒操作說明書為準(zhǔn))

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的加樣:設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;。

2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測樣

品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育30分鐘。

4. 配液:將3048T20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水3048T 20 倍)倍稀釋后備用。

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此

重復(fù)5次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。

7. 溫育:操作同3

8. 洗滌:操作同5。

9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯

15分鐘. 

10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。測定應(yīng)在加終止液

15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

還有更多疑問建議或需要wb實(shí)驗(yàn)外包的同學(xué)可點(diǎn)擊普拉特澤”了解咨詢哦,提供原始數(shù)據(jù),死磕真實(shí)實(shí)驗(yàn)!


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