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  大家好，今天普拉特澤生物跟大家一起學(xué)習(xí)一個新的實驗——細胞劃痕實驗。細胞劃痕實驗（WoundHealing）是一種操作簡單，經(jīng)濟實惠的研究細胞遷移/腫痛侵襲的體外試驗方法。細胞劃痕實驗介紹由普拉特澤細胞實驗平臺分享，細胞平臺專門為科研工作者提供細胞劃痕實驗代做服務(wù)，提供結(jié)果真實，技術(shù)高質(zhì)量的細胞實驗服務(wù)?，F(xiàn)在我們就來看看細胞劃痕實驗的原理和應(yīng)用流程吧！

  細胞劃痕實驗是測定細胞遷移運動與修復(fù)能力的常用方法，類似體外傷口愈合模型，故又稱傷口愈合法。細胞劃痕實驗的原理是，當(dāng)細胞長到融合成單層狀態(tài)時，在融合的單層細胞上人為制造一個空白區(qū)域，稱為“劃痕”。劃痕邊緣的細胞會逐漸進入空白區(qū)域使“劃痕”俞臺，基本的步騾包括“劃痕”的制造，細胞遷移期間圖像的獲得以及后期數(shù)據(jù)的處理。

  細胞劃痕實驗的操作主要是：在體外將細胞培養(yǎng)在培養(yǎng)皿或平板上，當(dāng)細胞長到融合成單層狀態(tài)時，用微量槍頭或其他硬物在細胞生長的中央?yún)^(qū)域劃線，去除中央部分的細胞，在融合的單層細胞上人為制造一個空白區(qū)域，稱為"劃痕"。然后繼續(xù)培養(yǎng)細胞，劃痕邊緣的細胞會逐漸進入空白區(qū)域使"劃痕"愈合，每間隔一段時間（如間隔12小時），顯微鏡下拍照，記錄細胞向中央空白區(qū)遷移情況，以此判斷細胞的遷移能力。

        1、細胞接種

        2、細胞劃痕

        3、細胞遷移期間圖像拍照

        3、數(shù)據(jù)處理。

        那細胞劃痕實驗可以應(yīng)用在哪些方面呢？給大家介紹一個案例（文末附參考文獻）。

        細胞劃痕實驗可用于：硫酸軟骨素與地塞米松在自動化軟骨細胞劃痕損傷修復(fù)中的作用研究

        1、自動平臺上制造軟骨細胞劃痕模型。

        2、通過劃痕閉合情況，獲得CS促進軟骨損傷修復(fù)的最佳濃度。

        3、研究硫酸軟骨素和地塞米松對軟骨細胞損傷修復(fù)的影響。

        研究方法：

        1、體外提取、培養(yǎng)原代SD大鼠關(guān)節(jié)軟骨細胞，通過細胞形態(tài)學(xué)及II膠原免疫熒光染色方法進行細胞鑒定。

        2、應(yīng)用自動平臺制造軟骨細胞劃痕模型。

        3、實時監(jiān)測觀察軟骨細胞劃痕的閉合過程。

        4、應(yīng)用計數(shù)有劃痕處固定相等區(qū)域內(nèi)軟骨細胞數(shù)目，確定促進軟骨細胞愈合的最佳硫酸軟骨素（CS）濃度。

        5、應(yīng)用live/dead kit staining方法觀察細胞存活率。

        6、應(yīng)用免疫熒光技術(shù)（Immunofluorescence technique）檢測單純劃痕組、CS組、地塞米松組、CS和地塞米松共同作用組對I型及II型膠原的表達情況。

        實驗結(jié)果：

        1、應(yīng)用自動平臺制造出8通道的劃痕，劃痕具有水平的起點、止點及相同的寬度。

        2、濃度為200μg/ml的CS對于軟骨細胞劃痕愈合的促進作用最大。

        3、兩種藥物共同作用時CS可減輕地塞米松對于軟骨細胞增殖的抑制作用，I型膠原表達量較單獨應(yīng)用地塞米松組減少，II型膠原表達量則增多。

        實驗結(jié)論：

        1、硫酸軟骨素對于軟骨細胞劃痕愈合具有促進作用，且在濃度200μg/ml時作用效果最佳。

        2、硫酸軟骨素對于糖皮質(zhì)激素引起的軟骨損傷具有修復(fù)作用。如臨床應(yīng)用糖皮質(zhì)激素，可加用硫酸軟骨素保護關(guān)節(jié)軟骨。

        好啦，那關(guān)于細胞劃痕實驗的簡單介紹我們就講到這里啦，有細胞實驗不懂的問題或者需要細胞實驗外包可以留言，咱們會逐一聯(lián)系，詳細溝通的哦！

        【參考文獻】

        Culture of bovine articular chondrocytes in funnel-like collagen-PLGA hybrid sponges This work was presented at the International Union of Materials Research Societies（International Conference in Asia）（Qingdao,China,Sep.25–28 2010）.[J].Hongxu Lu,Young-Gwang Ko,Naoki Kawazoe,Guoping Chen.Biomedical Materials.2011(4)

        殷貴鯤.硫酸軟骨素與地塞米松在自動化軟骨細胞劃痕損傷修復(fù)中的作用[D].大連醫(yī)科大學(xué),2014.