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細(xì)胞凋亡檢測(cè)常見(jiàn)問(wèn)題與解決方法——細(xì)胞凋亡檢測(cè)外包

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Question 1：用流式檢測(cè)細(xì)胞凋亡和用Tunel染色檢測(cè)細(xì)胞凋亡，為什么細(xì)胞的凋亡率不一樣？Tunel測(cè)出來(lái)的死亡率特別高，怎么破？

A：客觀(guān)來(lái)說(shuō)，用不同的試驗(yàn)方法來(lái)檢測(cè)細(xì)胞凋亡哪怕是同一批樣本、同一個(gè)人操作也可能會(huì)因?yàn)闀r(shí)間溫度、樣本污染、操作不當(dāng)?shù)葐?wèn)題造成結(jié)果上相應(yīng)的偏差，但是不會(huì)太大。Tunel染色檢測(cè)的是凋亡最晚期的DNA片段化，而且在Tunel檢測(cè)過(guò)程中，把操作損傷的細(xì)胞和壞死的細(xì)胞也當(dāng)做了凋亡細(xì)胞，如果最后的結(jié)果數(shù)據(jù)是用的肉眼來(lái)看的話(huà)也會(huì)有經(jīng)驗(yàn)判斷上的誤差，所以Tunel檢測(cè)細(xì)胞凋亡時(shí)凋亡率高一點(diǎn)是正常的。這兩種方法結(jié)果不同的造成原因?qū)嵲谑怯刑嗟牟淮_定性了，如果你也是有相同的問(wèn)題，可以給客服留言將詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)過(guò)程描述出來(lái)，方便技術(shù)人員回復(fù)~

Question 2：收集準(zhǔn)備檢測(cè)細(xì)胞凋亡的樣本時(shí)，貼壁細(xì)胞做流式前用細(xì)胞刮好還是用胰酶消化下來(lái)比較好？

A：胰酶對(duì)細(xì)胞的傷害確實(shí)挺大的胰酶屬于異種蛋白酶，可以將細(xì)胞膜上和培養(yǎng)皿結(jié)合的蛋白質(zhì)降解，對(duì)細(xì)胞也有傷害，我們實(shí)驗(yàn)室對(duì)不同的細(xì)胞有不同的消化方式，貼壁細(xì)胞也有多種，區(qū)別對(duì)待所以不同的細(xì)胞樣本有不同的取樣方法，如果是貼壁能力很強(qiáng)的細(xì)胞胰酶也很難消化下來(lái)，還是用細(xì)胞刮比較好，正常操作就細(xì)胞不會(huì)損傷很多。

流式檢測(cè)細(xì)胞周期

Question 3：冷凍保存后的組織切塊再做流式會(huì)不會(huì)對(duì)結(jié)果有什么影響？

A：會(huì)，而且影響很大。流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞需要細(xì)胞活性好、單個(gè)分散，這樣才方便實(shí)驗(yàn)過(guò)程中區(qū)分死亡、凋亡和正常細(xì)胞，組織在凍存、解凍后會(huì)有大量細(xì)胞死亡、細(xì)胞活性下降、粘連破碎等問(wèn)題，無(wú)法再上機(jī)檢測(cè)。流式檢測(cè)最好是用新鮮的剛?cè)〔牡臉颖具M(jìn)行檢測(cè)，數(shù)據(jù)準(zhǔn)確，操作方便。

Question 4：用Tunel測(cè)細(xì)胞樣本時(shí)熒光信號(hào)弱或者沒(méi)有熒光信號(hào)，是染色沒(méi)染上嗎？

A：不一定，如果確定細(xì)胞或組織是出處于凋亡的狀態(tài)，我們要注意的是：操作時(shí)樣本切片切得薄一點(diǎn)，方便染色；脫蠟和水化時(shí)如果不充分也會(huì)影響染色液上色；切片不新鮮也會(huì)影響染色效率，和做流式檢測(cè)一樣盡量選擇新鮮的切片；熒光易碎滅，所以操作時(shí)要觀(guān)察快速且避光。

Question5：用的Tunel染色檢測(cè)細(xì)胞凋亡時(shí)熒光的背景很強(qiáng)，怎么解決呢？

A：熒光背景過(guò)強(qiáng)影響結(jié)果的觀(guān)察的話(huà)可能是因?yàn)?/span>Tunel染色的時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或染色液濃度太高，適當(dāng)?shù)慕档突驕p少濃度和染色時(shí)間一般會(huì)有所緩解。如果沒(méi)有緩解的話(huà)可以適當(dāng)調(diào)整曝光的條件，將陰性對(duì)照組地背景光調(diào)到無(wú)，然后用這個(gè)曝光的條件去拍攝實(shí)驗(yàn)組。
好啦，那么關(guān)于細(xì)胞凋亡檢測(cè)的詳細(xì)實(shí)驗(yàn)步驟、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)以及操作過(guò)程中的常見(jiàn)問(wèn)題和解決方法我們就全部介紹完了，不記得的同學(xué)鏈接奉上，記得要溫故而知新哦。

《流式檢測(cè)細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)原理與步驟》

《流式檢測(cè)細(xì)胞凋亡操作注意事項(xiàng)》

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