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        細(xì)胞培養(yǎng)常見問題及處理方法匯總由普拉特澤生物——細(xì)胞實驗平臺為大家總結(jié)分享。細(xì)胞培養(yǎng)作為各種細(xì)胞實驗與研究的重要基礎(chǔ)，操作量都是非常龐大的，會遇到各種各樣的問題影響實驗結(jié)果。今天普拉特澤生物給大家總結(jié)所有細(xì)胞實驗平臺成立以來所有的技咨詢與我們的技術(shù)在操作時遇到的所有問題，一起來看看吧！

        一、培養(yǎng)液出現(xiàn)沉淀，但pH值不變

        解決方法：

        1、用洗滌劑清洗后殘留磷酸鹽將培養(yǎng)基成分沉淀下來，冰凍保存培養(yǎng)液；

        2、用去離子水反復(fù)沖洗玻璃器皿，然后除菌；

        3、將培養(yǎng)液加熱到 37℃，搖動使其溶解如沉淀仍然存在，丟棄培養(yǎng)液；

        二、培養(yǎng)液出現(xiàn)沉淀， 同時 pH 發(fā)生變化
  原因：細(xì)菌或真菌污染；

        解決方法：丟棄培養(yǎng)物，或用抗生素除菌；

        三、培養(yǎng)細(xì)胞不貼壁
   原因：

         1、胰蛋白酶消化過度；

         2、支原體污染；

         3、培養(yǎng)液中無貼壁因子；

         解決方法：

         1、縮短胰蛋白酶消化時間或降低胰蛋白酶濃度；

         2、分離培養(yǎng)物，檢測支原體，清潔支架和培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培物；

         四、懸浮細(xì)胞成簇

         原因：
   1、培養(yǎng)液中含鈣、鎂離子；

          2、支原體污染；

          3、蛋白酶過度消化使得細(xì)胞裂解釋放DNA；
   解決方法:

          1、用無鈣鎂平衡鹽溶液洗滌細(xì)胞，輕輕吹吸細(xì)胞獲得單細(xì)胞懸液；

          2、分離培養(yǎng)物，檢測支原體。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物；

          3、用 DNase1處理細(xì)胞；

            五、培養(yǎng)細(xì)胞死亡

           原因：

            1、培養(yǎng)箱內(nèi)無 CO2；

            2、培養(yǎng)箱內(nèi)溫度波動太大；

            3、細(xì)胞凍存或復(fù)蘇過程中損傷；

            4、培養(yǎng)液滲透壓不正確；

            5、培養(yǎng)液中有毒代謝產(chǎn)物堆積；

           解決方法：

           1、檢測培養(yǎng)箱內(nèi)CO2；

           2、檢查培養(yǎng)箱內(nèi)溫度；

           3、取新的保存細(xì)胞種；

           4、檢測培養(yǎng)液滲透壓，注意:大多數(shù)哺乳動物細(xì)胞能耐受滲透壓為260-350mOsm/kg；

           5、加入額外試劑如HEPES或藥物都有可能影響培養(yǎng)液滲透壓；

           6、換入新鮮培養(yǎng)液；

          六、培養(yǎng)細(xì)胞生長減慢

          原因：

           1、由于更換不同培養(yǎng)液或血清；

           2、培養(yǎng)液中一些細(xì)胞生長必需成分如谷氨酰胺或生長因子耗盡或缺乏或已被破壞；

           3、培養(yǎng)物中有少量細(xì)菌或真菌污染；

           4、試劑保存不當(dāng)；

           5、細(xì)胞起始濃度太低；

           6、細(xì)胞已老化；

           7、支原體污染；

          解決方法：

          1、比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分，比較新血清與舊血清支持細(xì)胞生長實驗；

          2、增加起始培養(yǎng)細(xì)胞濃度；

          3、讓細(xì)胞逐漸適應(yīng)新培養(yǎng)液；

          4、換入新鮮配制培養(yǎng)液；

          5、補(bǔ)加谷氨酰胺或生長因子；

          6、用無抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng)，如發(fā)現(xiàn)污染，丟棄培養(yǎng)物?；蛴每股爻?；

          7、血清需保存在-5℃到-20℃。培養(yǎng)液需在2-8℃避光保存。含血清完全培養(yǎng)液在2-8℃保存，并在2周內(nèi)用完；

          8、增加接種細(xì)胞起始濃度；

          9、換用新的保種細(xì)胞；

          10、分離培養(yǎng)物，檢測支原體。清潔支架和培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物；

          好啦，那所有的實驗咱們就想講到這里啦，如果您還有其他的問題或細(xì)胞實驗需要外包可直接留言，技術(shù)會第一時間回復(fù)您噠~我們下期見！