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        植物細(xì)胞的培養(yǎng)方法由普拉特澤生物——細(xì)胞實(shí)驗(yàn)平臺(tái)為大家總結(jié)分享。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)平臺(tái)專業(yè)承接各類細(xì)胞實(shí)驗(yàn)外包代做服務(wù)，細(xì)胞培養(yǎng)作為細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的基建部分技術(shù)當(dāng)然是爛熟于心。上期我們講完了植物組織的培養(yǎng)方法，今天來看看和組織培養(yǎng)相關(guān)的植物細(xì)胞的培養(yǎng)方法：

        一、從外植體分離植物細(xì)胞

        1、選擇適當(dāng)生長(zhǎng)期的健康植株。

        2、對(duì)外植體消毒處理

        (1)沖刷材料，用流水幾分鐘—數(shù)小時(shí)

        (2)表面浸潤(rùn)滅菌;超凈臺(tái)70%酒精10-30S

        (3)深層滅菌; 氯化汞次氯酸鈉

        (4)無菌水沖洗。3 min/次3-10次

        二、通過愈傷組織誘導(dǎo)獲取植物細(xì)胞

        獲得愈傷組織后，挑選質(zhì)量好的愈傷組織塊，用無菌的鑷子或小刀分割得到植物小細(xì)胞團(tuán)，也可以將愈傷組織轉(zhuǎn)移到液體培養(yǎng)基中，加入經(jīng)過滅菌處理的玻璃珠，進(jìn)行振蕩培養(yǎng)，使愈傷組織分散成為小細(xì)胞團(tuán)或單細(xì)胞，然后用適當(dāng)孔徑的不銹鋼篩網(wǎng)過濾，除去大細(xì)胞團(tuán)和殘?jiān)?，得到一定體積的小細(xì)胞團(tuán)或單細(xì)胞懸浮液。

        三、細(xì)胞培養(yǎng)

        1、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)

        懸浮培養(yǎng)是細(xì)胞培養(yǎng)的基本方法，是將單個(gè)游離細(xì)胞或小細(xì)胞團(tuán)在液體培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)增殖的技術(shù)。懸浮細(xì)胞樣本的選擇要求為松散性好，增殖快，再生能力強(qiáng)。

        2、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)同步化

        植物細(xì)胞在懸浮培養(yǎng)中的游離性較差，容易團(tuán)聚進(jìn)入不同程度的分化狀態(tài)，因此要達(dá)到完全同步化相當(dāng)困難?？赏ㄟ^以下四個(gè)方法使其同步化：

        （1）體積選擇法：通過細(xì)胞體積大小分級(jí)，直接將處于相同周期的細(xì)胞進(jìn)行分選，然后將同一狀態(tài)的細(xì)胞繼代培養(yǎng)于同一培養(yǎng)體系中。

        （2）饑餓法：在一個(gè)培養(yǎng)體系中，如果細(xì)胞生長(zhǎng)的基本成分喪失，則導(dǎo)致細(xì)胞因饑餓而分裂受阻，從而停留在某一分裂時(shí)期。

        （3）抑制法:通過一些DNA合成抑制劑處理細(xì)胞，使細(xì)胞滯留在DNA合成前期，當(dāng)解除抑制后，即可獲得處于同一細(xì)胞周期的同步化細(xì)胞。

        （4）低溫法：冷處理也可提高培養(yǎng)體系中細(xì)胞同步化程度。

        3、單細(xì)胞培養(yǎng)

        在進(jìn)行細(xì)胞株(種子細(xì)胞)選擇和需要對(duì)細(xì)胞活動(dòng)跟蹤觀察的情況下，必須進(jìn)行真正意義上的單細(xì)胞培養(yǎng)。由于植物細(xì)胞的團(tuán)聚性，單細(xì)胞培養(yǎng)還比較困難，而懸浮培養(yǎng)不能對(duì)某一細(xì)胞進(jìn)行定點(diǎn)觀察和分析，也就不能進(jìn)行定點(diǎn)選擇。主要包括以下三種培養(yǎng)方法：

        （1）平板培養(yǎng)

        l 平板培養(yǎng)是將一定密度的懸浮細(xì)胞接種到一薄層固體培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)的技術(shù)主要步驟為：

        l 單細(xì)胞的分離：用于平板培養(yǎng)的小細(xì)胞團(tuán)不能超過6個(gè)細(xì)胞，所以過濾時(shí)篩網(wǎng)的網(wǎng)孔大小要合適。

        l 單細(xì)胞懸浮液的制備：分離的單細(xì)胞經(jīng)低速離心，培養(yǎng)液洗滌2次后，調(diào)整密度為5x10⁵/ml。

        l 植板：將1份已調(diào)整好密度的單細(xì)胞懸浮液與4份35℃的固體培養(yǎng)基充分混合均勻，然后均勻地平鋪于培養(yǎng)皿中，厚度約1~2 mm。

        l 封口：用石蠟?zāi)し馀囵B(yǎng)皿。

        （2）看護(hù)培養(yǎng)

        看護(hù)培養(yǎng)是指在固體培養(yǎng)基上置入一塊活躍生長(zhǎng)的愈組織，再在愈傷組織上放一小片濾紙，待濾紙濕潤(rùn)后將細(xì)胞接種于濾紙上。當(dāng)培養(yǎng)細(xì)胞長(zhǎng)出微小細(xì)胞團(tuán)以后，將其直接轉(zhuǎn)至瓊脂培養(yǎng)基上讓其迅速生長(zhǎng)

        （3）微室培養(yǎng)

        人工制造一個(gè)小室，將單細(xì)胞培養(yǎng)在小室中的少量培養(yǎng)基上，使其分裂增殖形成細(xì)胞團(tuán)。它可對(duì)單細(xì)胞進(jìn)行活體連續(xù)觀察，這一方法也可用于原生質(zhì)體培養(yǎng)觀察細(xì)胞壁的再生和細(xì)胞分裂過程。

        4、原生質(zhì)體培養(yǎng)

        原生質(zhì)體具有全能性、無細(xì)胞壁障礙、吸收能力強(qiáng)、分泌能力高、可進(jìn)行細(xì)胞融合等特點(diǎn)。操作步驟主要是：

        l 基礎(chǔ)材料準(zhǔn)備

        l 預(yù)處理與酶解(或機(jī)械破壁)

        l 原生質(zhì)體收集與純化

        l 原生質(zhì)體活力測(cè)定

        好啦，那關(guān)于植物細(xì)胞的培養(yǎng)方法我們就介紹到這里啦，如果您有更多不懂的問題咨詢、細(xì)化學(xué)習(xí)某一培養(yǎng)步驟或是細(xì)胞實(shí)驗(yàn)需要外包與代做，都可以留言給我們，咱們一起學(xué)習(xí)共同進(jìn)步哦！