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   免疫熒光實操注意事項由普拉特澤生物——病理實驗平臺總結分享，文末附上免疫熒光實操視頻教程供大家學習。免疫熒光實驗結果漂亮，適合放入高檔次文章，但要得到一張好看又有參考意義的專業(yè)染色結果要注意很多操作上的細節(jié)，普拉特澤生物承接多例免疫熒光實驗代做，給客戶提供大量優(yōu)質的實驗報告與結果圖，專業(yè)優(yōu)質，值得信賴。

        那么免疫熒光有哪些注意事項呢？

        1、組織分切后，應迅速置入冰壺，并立即送至恒溫切片機內進行包埋切片。

        2、如果不能馬上切片，應將標本立即置入零下七十度的低溫冰箱內以保持抗原活性，防止抗原的移位或丟失，但在低溫冰箱內放置的時間不應超過兩日。

        3、供免疫熒光檢查的組織，應避免接觸任何固定液，特別是含有乙醇的固定液。

        4、進行首次熒光抗體染色時，要做對照染色。

        5、 由于熒光容易淬滅，一般僅能維持幾個小時，因此，熒光二抗應避光保存，即從加入熒光二抗以后的步驟中都要盡量避光操作，封片后應盡早照相。目前有市售的熒光增強劑，可使熒光在4℃保存1-2周仍不淬滅。

        6、 常用的熒光素有以下幾種，綠色熒光：FITC、 Alexa Fluor 488和GFP；紅色熒光：TRITC、Cy3、Alexa Fluor 568&594和Mito Tracker Red；藍色熒光：Hoechst、DAPI；黃色熒光：YFP、Fluo-3和Rhoda-minel23等。

        7、不同的熒光素激發(fā)的波長不同，因此，選用濾光片時要注意。一般紫外線的激發(fā)波長為334-365nm，藍光的激發(fā)波長為435-490 nm，綠光的激發(fā)波長為546nm左右。

        8、熒光顯微鏡應提前至少15 min打開汞燈預熱。關閉30 min后方可再開啟。

        9、免疫熒光的組織要求很高，載玻片及蓋玻片要干凈無雜質。進行熒光染色時，需注意染液的pH、濃度和染色溫度，還要避免對熒光有熄滅作用的物質的接觸。組織和細胞也有自發(fā)熒光，如紅細胞中的血紅蛋白呈紅色熒光，維生素A呈綠色自發(fā)性熒光等。

        以上就是免疫熒光在實際操作中容易發(fā)生問題的小細節(jié)，進一步學習請點擊視頻學習《免疫熒光/IF染色 理論+實操》，準備做免疫熒光實驗的新手們請注意避雷，當然如果您覺得比較復雜繁瑣歡迎委托給普拉特澤生物病理實驗平臺，隨時為您服務！