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實驗介紹
【應用簡介】
衰老細胞的形態(tài)變化主要表現(xiàn)為形狀變大、變平、胞核增大、核膜內(nèi)陷、染色質(zhì)固縮、胞內(nèi)溶酶體變多等。衰老細胞中細胞器數(shù)量尤其是線粒體數(shù)量減少，胞質(zhì)內(nèi)有色素堆積和空泡形成，最終導致細胞死亡。總體來說衰老細胞的各種結構呈退行性變化。根據(jù)其特征，目前常用β-半乳糖苷酶活性檢測衰老。
【技術原理】
衰老細胞或組織產(chǎn)生的β-半乳糖苷酶可以催化底物X—Gal，生成深藍色產(chǎn)物，從而在光學顯微鏡下很容易觀察到。在人體表皮角質(zhì)層細胞中，也可以發(fā)現(xiàn)SA-β-gal隨年齡的增加而增加。并且，SA-β-gal不依賴于DNA復制，可以區(qū)分衰老細胞與靜止期的細胞。
【實驗方法】
Step1：細胞培養(yǎng)
Step2：細胞轉染或藥物處理
Step3：處理結束后進行細胞β-半乳糖苷酶檢測
Step4：200x鏡下觀察
案例展示
經(jīng)過處理后，細胞衰老程度顯著增加。
技術總結
細胞在體外培養(yǎng)時，會隨著傳代次數(shù)的增加，衰老情況隨之增加，表現(xiàn)為衰老細胞增多或細胞更容易衰老。因此，在細胞傳至20代左右時，可取一部分細胞進行β-半乳糖苷酶染色分析，發(fā)現(xiàn)陽性結果即誘導成功。如染色不理想，則可增加外部因素處理，如不同濃度的雙氧水，處理時間可自己選擇，但不宜過長。外部因素處理后，可從中選取部分細胞進行染色分析?；蛘?，在細胞鋪板培養(yǎng)過程中，提高細胞的接種密度，同時使用無血清的培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，一樣選擇部分細胞進行染色分析。以上操作可交替進行。直至出現(xiàn)染色陽性結果。
送檢與交付標準
| 樣品類型 | 樣品需求 | 保存條件 | 運輸條件 | 備注 |
|---|---|---|---|---|
| 凍存細胞 | 1.取對數(shù)生長期的細胞，消化離心收集細胞，加入凍存液吹打混勻，裝入凍存管，標明細胞名稱/細胞代數(shù)，凍存細胞數(shù)量在1-5*106個/ml。 2.項目啟動后細胞復蘇，復蘇后3天反饋細胞狀態(tài)，3-5天反饋細胞污染情況，5-7天反饋支原體污染情況。 3. 細胞詳細信息（名稱、培養(yǎng)基和其他培養(yǎng)條件等，如經(jīng)過特別處理需告知并提供必要的信息） | 液氮 | 干冰 | 所有樣本均須有唯一標記，且標記清晰可識 |
| 復蘇后細胞 | 1.使用T25培養(yǎng)瓶運輸。細胞匯合度達到60%以上，裝滿培養(yǎng)液，只留紐扣大小的氣泡，瓶口用封口膜封好，標明細胞名稱/細胞代數(shù)/接種時間/培養(yǎng)基類型，瓶子固定運輸。 2.收到細胞后3天反饋細胞狀態(tài)，3-5天反饋細胞污染情況，5-7天反饋支原體污染情況。 3. 細胞詳細信息（名稱、培養(yǎng)基和其他培養(yǎng)條件等，如經(jīng)過特別處理需告知并提供必要的信息） | 常溫 | 常溫 | |
| 質(zhì)粒 | 1.純度高，無內(nèi)毒素，無蛋白質(zhì)，基因組DNA/RNA污染，質(zhì)粒A260:A280的比值在1.8-2.0之間 2.濃度不低于0.5μg/μl，總量大于100μg，無內(nèi)毒素處理 3. 載體詳細信息，包括名稱、大小、抗性、熒光標記 | -20℃ | 冰袋 | |
| 病毒 | 1.慢病毒：滴度不低于1*108TU/ml，體積約200μl，標明制備時間，且沒有反復凍融 2.腺病毒：滴度不低于1*109PFU/ml，體積約200μl，標明制備時間，且沒有反復凍融 3.明確是否表達熒光標簽蛋白及其種類，最好需要提供病毒載體圖譜； | -80℃ | 干冰 |
電話：400-691-6686
在線時間：8:00-24:00
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