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Northern Blot

Northern印跡雜交(Northern blot)。這是一種將RNA從瓊脂糖凝膠中轉(zhuǎn)印到硝酸纖維素膜上的方法。DNA印跡技術(shù)由Southern于1975年創(chuàng)建,稱為Southern印跡技術(shù),RNA印跡技術(shù)正好與DNA相對(duì)應(yīng),故被稱為Northern印跡雜交。

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實(shí)驗(yàn)介紹

【技術(shù)原理】

       提取質(zhì)量良好的RNA樣品,并將其固定在硝酸纖維膜或尼龍膜等固相上,加入標(biāo)記的核酸探針進(jìn)行雜交。按照堿基互補(bǔ)配對(duì)原則,核酸探針會(huì)與固相上的RNA同源序列進(jìn)行互補(bǔ),加入顯色系統(tǒng)即能顯示出雜交信號(hào),通過檢測(cè)信號(hào)的有無、強(qiáng)弱可以對(duì)樣品定性、定量分析。


【技術(shù)應(yīng)用】

1、定性及定量分析基因轉(zhuǎn)錄水平差異;

2、檢測(cè)目的基因是否具有可變剪切產(chǎn)物或者重復(fù)序列。


【技術(shù)流程】

案例展示

Southern blot案例.png

送檢與交付標(biāo)準(zhǔn)

樣品類型樣品需求保存條件運(yùn)輸條件備注
動(dòng)物組織單個(gè)樣品>0.1g,2mlEP管或凍存管裝,不要過量;樣本應(yīng)盡量新鮮,如不能立即提取蛋白或核酸,應(yīng)液氮速凍后凍存于-80℃或更低,凍存樣本避免反復(fù)凍融以致降解-80℃干冰所有樣本均須有唯一標(biāo)記,且標(biāo)記清晰可識(shí)
種子樣本去殼新鮮或保存于液氮中的的種子樣本,單個(gè)樣品>0.2g。-80℃干冰
貼壁/懸浮細(xì)胞

1. 總RNA或蛋白:106cell/指標(biāo)、漿/核RNA或蛋白:107cell/指標(biāo)、線粒體RNA或蛋白:2*107     cell/指標(biāo),樣本盡量新鮮,細(xì)胞收取后直接加Trizol(QPCR檢測(cè))或直接凍存于-80℃       

2. 若細(xì)胞處理(加藥、轉(zhuǎn)染、感染)后狀態(tài)差應(yīng)酌情加大收樣量

-80℃干冰
全血/血清樣品用抗凝管保存的外周血 5~10ml,骨髓 1~3ml; -80℃保存不超半周的白細(xì)胞勻漿>400μl,每 400μl 加入 400μl Trizol。-80℃干冰
石蠟包埋樣品由標(biāo)準(zhǔn)的石蠟包埋盒包埋的石蠟塊,有效厚度大于 0.1cm; 新鮮的 FFPE 組織切片,每片厚度不超過 10μm,2~8 張,表面積不超過 250mm2。-20℃冰袋
抗體

1. 按樣本種屬提供滿足相應(yīng)實(shí)驗(yàn)要求的抗體;

2. 按抗體說明書要求寄送,盡量避免分裝;如分裝,確保量足夠進(jìn)行實(shí)驗(yàn),并提供抗體說明書。

3.保存抗體的抗體管上應(yīng)有能夠識(shí)別此抗體的標(biāo)記,抗體的量應(yīng)大于實(shí)驗(yàn)所需的量。

-20℃冰袋
引物干粉,≥1OD,如進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn),每個(gè)基因至少提供兩對(duì)引物, 附帶公司引物合成單。-20℃冰袋或常溫




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