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首頁 > 檢測服務 > RNA熒光原位雜交

RNA熒光原位雜交

將核酸探針的某一種核苷酸標記上報告分子如生物素或直接標記熒光素,可利用該報告分子與熒光素標記的特異親和素之間的免疫化學反應或直接經熒光檢測體系在鏡下對待測核酸(mRNA、lncRNA、circRNA、miRNA)進行定性、半定量或相對定位分析的一種實驗方法。

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實驗介紹

【技術原理】

        RNA-FISH原理:如果待檢測的細胞或組織切片上的靶核酸與所用的核酸探針是同源互補的,二者經‘’變性-退火-復性‘’,即可形成靶核酸與核酸探針的雜交體。將核酸探針的某一種核苷酸標記上報告分子如生物素或直接標記熒光素,可利用該報告分子與熒光素標記的特異親和素之間的免疫化學反應或直接經熒光檢測體系在鏡下對待測核酸(mRNA、lncRNA、circRNA、miRNA)進行定性、半定量或相對定位分析的一種實驗方法。


【實驗流程】


原位雜交.png

案例展示

1591342997501883.png熒光原位雜交.jpg


細胞的circRNA熒光原位雜交

注意事項

1、烤好的組織切片需經過脫蠟處理,二甲苯脫蠟不足會導致探針雜交強度和雜交效率降低、熒光背景高等,影響實驗結果。可根據(jù)實際情況延長脫蠟時間。

2、酶消化注意事項:

酶的濃度過高、消化時間過長或孵育溫度過高,會對細胞的結構有一定的破壞,細胞核消失或細胞核辨認不清,也會造成一定程度的組織脫片;

酶消化不足會造成蛋白消化不透徹,降低組織的通透性以及雜交信號的強度和雜交率;

消化酶均為現(xiàn)用現(xiàn)配。

3、由于熒光原位雜交探針雜交的區(qū)段長,在組織或細胞塊切片中,可能出現(xiàn)人為的信號異常,如缺失、分離等

送檢與交付標準


樣品類型樣品需求保存條件運輸條件備注
新鮮組織新鮮取材組織,用 PBS 清洗干凈血液等,立即-80℃保存-80℃干冰所有樣本均須有唯一標記,且標記清晰可識
一般固定組織一般組織體積不超過2cmX2cmX0.5cm,固定時盡量保持組織的原有形態(tài)并清理干凈血液及多余部分,如腸道內容物;固定液體積為組織大小的10倍以上,容器足夠容納組織不使其擠壓變形。標注好固定液類型和固定時長常溫常溫
特殊固定組織睪丸、眼球、脊髓、肌肉等組織:推薦使用對應的特殊固定液進行固定,以保證固定效果。如Bouin液,適用于睪丸組織、皮膚組織及眼球的固定

組織蠟塊組織由標準的石蠟包埋盒包埋(尺寸為30*24*7mm),石蠟與組織要均勻接合,不能有裂痕;蠟塊厚度根據(jù)所需切片的數(shù)量而定,有效厚度至少要超過 0.1cm。盡量提供半年內的組織蠟塊,超過半年的蠟塊抗原可能丟失,做免疫組化可能出現(xiàn)檢測不到蛋白。常溫常溫
組織切片需用防脫載玻片進行撈片,并注明切片厚度、已烤片溫度與時間,組織應在靠近切片下端 1/3 處。4℃冰袋
細胞爬片使用 12 孔板或 24 孔板專用細胞爬片,細胞爬片經固定后用 PBS 洗滌 2~3 次,保存在 PBS 中,用封口膜密封孔板。每個爬片在孔板蓋上應有唯一的標記,并有電子版的分組信息,以防標記在運輸途中模糊。常溫常溫
植物樣本新鮮組織FAA固定,木質化程度不高;對于較薄的葉片,如果要求平行葉片切片,難以保證切完整;根莖要求直徑>1mm常溫常溫
抗體保存抗體的抗體管上應有能夠識別此抗體的標記,并附帶說明書,抗體的量應大于實驗所需的量。組織切片、組織芯片按稀釋后 100μl 一張切片計算抗體用量, 24 孔板細胞爬片圓形蓋玻片按稀釋后 200μl 一張計算抗體用量,12 孔板細胞爬片圓形蓋玻片按稀釋后 400μl 一張計算抗體用量。-20℃冰袋或干冰




病理交付標準.jpg

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